小鼠线粒体DNA缺失突变实时定量PCR检测及康欣口服液对其影响研究.pdfVIP

0‘ ㈩Ull l I 11111I I III I I IIl Y1 小鼠线粒体DNA缺失突变的实时定量PcR检测及i 康欣口服液对其影响的研究 曹芳莉 中文摘要 分子水平揭示以补肾健脾、养血活血法为组方原则的康欣口服液延缓衰老的机理，为临 床应用康欣口服液延缓衰老提供实验依据。 生型mtDNA的470bp片段，并将其克隆至pGEM—TEasy载体以构建重组质粒pGEM—T Easy／267和pGEM—T 立实时荧光定量PCR标准曲线，用以检测小鼠外周血mtDNA缺失突变。用实时荧光定量 为老年空白对照组(灌胃给予生理盐水)和老年康欣口服液组(灌胃给予康欣口服液)。 四个月后，采用实时荧光定量PCR的方法，检测两组小鼠外周血mtDNA缺失突变。 表野生型mtDNA的470bp片段，并将其克隆至pGEM—TEasy载体，得到了重组质粒pGEM—T Easy／470，以重组质粒为标准品建立了实时荧光定量PCR标准曲线 Easy／267和pGEM—T 青年小鼠外周血mtDNh中未检测到相同片段的缺失；与老年空白对照组比较，康欣口服 液能显著降低老年Balb／c小鼠mtDNA的缺失突变(P0．05)。 结论：1．实时荧光定量PCR方法是一种检测小鼠外周血线粒体缺失突变的有效方法， 该方法敏感性好，特异性高。2．外周血mtDNA的缺失随年龄增长而积累，在老年小鼠的 有保护作用。 关键词：荧光定量PCR；缺失突变；线粒体DNA；衰老；抗衰老药 mutationofmitochondria Detectionofdeletion micereal·timefluorescent PCRandeffectof by quantitative KangXinLiquid Cao Fangli Abstract of for themechanism KangXinliquid(a reinforcing Objective：Toexplore prescription and blood theeffectof KidneySpleen，removingstasis)inretardingagingbyinvestigating intakeontheof bloodmitochondrial Balb／c KangXinliquid peripheral DNA(mtDNA)inaged micereal—timefluorescent PCR． by quantitative Methods：Two and mtDNA deletionand fragments，267bp470bplong，represent4236bp DNAan mtDNA fromthe blood of