基于孕妇游离DNA的儿染色体非整倍体检测试剂质量.PDFVIP

基于孕妇游离DNA 的胎儿染色体非整倍体检测试剂质量 控制技术评价指南（高通量测序法） 1 1.前言 对孕妇外周血中游离DNA 进行高通量测序(High-Throughput Sequencing) ，并分析 孕妇外周血中携带的胎儿的染色体突变异常风险，特别是染色体非整倍体变异的检测， 是近几年出现的无创产前筛查新技术。 本指南旨在规范申请人在胎儿染色体非整倍体检测试剂盒（高通量测序法）的产品 设计开发、性能评价的指标和要求，并为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供 参考，不代替注册申报资料的准备及撰写的指南和规范。 本指南主要是对企业研发、质检和产品应用相关质量控制和分析的指导性文件，应 在遵循相关法规的前提下使用本指南。 本指南仅作为技术指导性文件使用，需根据技术的发展和实际需要进行适当的更新， 本指南不具有法律强制性。 2.适用范围 本指南所述的胎儿染色体非整倍体检测试剂（Noninvasive Prenatal Test, NIPT）是 采用低深度全基因组的高通量测序法，指的是直接通过对孕妇外周血中游离DNA 进行 文库构建、上机测序的第二代高通量测序方法，并不完全适用于高深度的目标片段测序 法， SNP 突变测序法和表观遗传学甲基化的测序法等其他高通量测序法。和本指南不 相适应的其他高通量测序法，可以参照本指南的性能评价、质量控制的要求，并通过企 业参考品，证明和本指南的要求具有实质性的等效性。 对于第三代单分子测序或其他测序方法，在文中并未涉及，但高通量测序技术发展 迅速，第三代单分子测序方法在企业内部参考品设臵、性能评估等，如有适用的方面， 可以参照执行并证实实质等效性。 2 适用检测类型：胎儿染色体非整倍体（fetal chromosome aneuploidies）中的21 三体、 18 三体、13 三体（Trisomies 21 、18、13，即T21、T18、T13）。本指南也可适用于其 它胎儿染色体非整倍体的检测，如XXX ，XYY ，XXY, T9 等。 适用人群：对孕周12 周（包含12 周）以上的孕妇进行产前筛查，其结果不能代表 对孕妇怀有三体胎儿的确认，必须要经过产前诊断进行确认。 伦理学问题：终止妊娠应在遵守我国相关法律法规和行业规定的前提下选择，该项 检测不得作为终止妊娠的依据。 3.诊断试剂的设计开发要求 基于游离DNA 的胎儿染色体非整倍体检测试剂（NIPT ）的设计和原理至少要考虑 到以下几个方面： 3.1 预期用途 明确胎儿染色体非整倍体检测试剂（NIPT ）的预期用途，包括定性或定量检测、 被测孕妇孕周特征、样本类型和被测物等。按照《体外诊断试剂说明书编写指导原则》 进行，介绍临床适应症及背景，说明相关的临床或实验室诊断方法等，应介绍产前诊断 金标准。明确该产品作为产前辅助诊断用途，其结果要由产前诊断金标准进行确认。 3.2 测试方法学 阐明胎儿染色体非整倍体检测试剂（NIPT ）的设计原理和方法学，需要重点指出 设计原理和方法的关键点：（1）详细说明母体胎儿游离DNA 判断染色体数量和检测 变量的相关性；（2）详细说明实验过程如高通量测序的文库构建方法及原理；（3）在 实验过程中的质量控制和标准品的构建；（4）数据分析和算法的详细说明等。 如低覆盖全基因组的胎儿染色体非整倍体检测试剂（NIPT ）原理是：孕妇母体血 浆中存在胎儿游离DNA （cffDNA ，cell-free fetal DNA），片段长度主要为～160bp，几 3 乎全部来源于胎盘的滋养层细胞，其浓度和孕周密切相关并以一定比例稳定存在于母体 外周血浆中。取母体血浆提取包含正常母体和胎儿的血浆游离DNA ，不经过处理或经 过片段化选择，通过文库构建，最后进行上机测序，再通过软件分析数据获得染色体数 目评价结果。当对怀有T21 胎儿的母体血浆游离DNA 数据进行分析时，其21 号染色 体游离DNA 总