黄粉虫抗菌肽的诱导、生物学活性测定及初步分离纯化.pdfVIP

黄粉虫抗菌肽的诱导、生物学活性测定及初步分离纯化 摘 要 本文通过采用不同的诱导方法对黄粉虫进行诱导，分别采用了紫外线诱导法、超声波 诱导法、针刺诱导法、菌液浸泡诱导法、饥饿诱导法、菌液注射诱导法等方法；每种诱导 方法分别采用不同剂量或不同的诱导时间，且诱导后分别培养不同的时间，之后取其血淋 巴并通过进行抑菌圈试验确定其是否已经产生抗菌活性物质，若产生则观察其抗菌活性的 强弱。试验得出在不同的诱导方法中采用菌液注射的方法注射1．09l／头、诱导后培养48h 效果最好；其次为菌液浸泡诱导法和饥饿诱导法；另外几种诱导方式虽有一定的抑菌效果 但不显著。本试验中同时对不同诱导方法分别采用了不同的诱导后培养时间，分别为24h、 48h、72h。结果发现诱导后培养不同的时间，其血淋巴的抑菌活性也存在很大差异，以 48h为最佳；若小于48h，在虫体内并没有完全形成系统有效的防御机制，因而抑菌活性 不理想；若大于48h，菌液在虫体内存留太长时间，且菌的繁殖速度很快，以致于大部分 供试虫体防御系统的形成速度远远小于菌在体内生长的速度，造成虫体萎靡不振、活动力 下降、血淋巴提取量减少，甚至使供试黄粉虫死亡，也不利于观察其抑菌活性。本文首次 对多种诱导方法进行了详细比较，从而筛选出较优的诱导方法。 以最佳诱导方法诱导后取血淋巴进行抗菌肽生物学活性的测定。分别进行了对热稳定 性、反复冻溶的稳定性、蛋白酶稳定性、pH值及有机溶剂对抗菌肽抑菌活性影响的测定。 菌效果；经反复冻溶后，抑菌圈直径均有一定程度的减小，但冻溶4次以下差异无显著 性、冻溶6--10次，抑菌活性与对照相比差异达显著性水平，但仍可观察到抑菌效果；经 胰蛋白酶及胃蛋白酶作用后抗菌肽的抑菌率均有所下降，而蛋白酶K对其抑菌活力影响不 大；pH值在5．0．9．0范围内，抑菌活性虽有一定程度的下降但均不能造成其抗菌活性的丧 失，而在pH5或pH9的环境条件下抑菌活性会受到很大影响或不表现活性；甲醇、正 丁醇对抗菌肽的抑茵活性无显著影响，乙醇、氯仿、异丙醇对抗菌肽的抑菌活性有一定影 响。通过以上结果得出结论：黄粉虫抗菌肽具有较好的热稳定性、在低温反复冻融后仍保 持有较高的活性、经蛋白酶作用后抗菌肽的抑菌活性有所下降；另外PH值、有机溶剂作 用也对抗菌肽的抑菌活性产生或多或少的影响。 用凝胶过滤层析分离纯化血淋巴中抗菌肽，以大肠杆菌为指示菌种，抗菌活性测定的 G50凝胶过滤柱层析分离后得到2个较明显的活性峰，结果显示从 结果表明，经Sephadex 收集的第5管至第19管均有抑菌活性，说明收集物是由多种成分混合在一起的，因而说明 G25 G50分离后有活性的部分合并在一起，浓缩后经Sephadex 分离的并不彻底。将Sephadex 凝胶过滤柱层析分离得到3个活性峰，表明黄粉幼虫血淋巴中有多个抗菌肽组分。如何分 离纯化到单体还有待于进一步研究。 本试验是黄粉虫抗菌肽进一步分离纯化研究的基础；并对如何更有效更便捷的诱导黄 粉虫使其产生抗菌肽首次进行了详细的比较与筛选，从而确定了一种较优较合理的诱导方 法；另外，通过对其生物学特性的研究与分析，为更好的保存及合理的利用和研究黄粉虫 抗菌肽提供了理论依据。 关键词：黄粉虫，抗菌肽，诱导，生物学活性，初步分离纯化 II of Research induce、biologic and aboutAntibacterialfromTenebriomolitor pmification Peptides A bstract ThetestuseddifferentinducemethodonTenebrio 6inducemethods：theultraviolet