nm2H1基因转染前后人大细胞肺癌细胞株抑制消减cDNA文库的构建.PDF

·482· 中国肺癌杂志 2008年8月第11卷第4期 Chin J Lung Cancer, August 2008, Vol.11, No.4 ·基 础 研 究 · nm23-H1基因转染前后人大细胞肺癌 细胞株抑制消减cDNA文库的构建 叶苏娟 冯志华 朱文 蔡春季 李潞 孙丽亚 万海粟 马力 周清华 已有的研究表明，nm23-H1 基因是一个重要的肺癌转移抑制基因，为了筛选与该基因表 【摘要 】背景与目的 达相关的差异表达基因，本研究拟构建nm23-H1 基因转染前后人大细胞肺癌细胞株（L9981和L9981-nm23-H1）差异 表达基因的抑制消减cDNA文库，为进一步筛选、克隆与nm23-H1 转移相关的基因奠定基础。方法 利用抑制消减杂 交（suppressive subtractive hybridization, SSH）技术构建nm23-H1 基因转染前后人大细胞肺癌细胞株（L9981和L9981- nm23-H1）间差异表达基因的正向和反向消减cDNA文库，经蓝白菌落筛选克隆，并PCR反应鉴定。结果 成功构建 了该两株细胞株差异表达基因的正向和反向消减cDNA文库。经蓝白菌落筛选，正向消减文库总共获得约300个白斑 克隆，反向消减文库总共获得约400个白斑克隆，从正反向消减文库中各挑选96个克隆进行PCR扩增检测是否有插 入片段，结果显示在挑选的正向文库中有84个克隆有插入片段，反向文库中有83个克隆有插入片段，其片段大小范 围为（300-750）bp。结论 抑制消减杂交是克隆差异表达基因的有效方法，我们应用SSH法和T/A克隆技术成功建 立了nm23-H1 基因转染前后人大细胞肺癌细胞株（L9981和L9981-nm23-H1）差异表达基因的抑制消减cDNA文库。 nm23-H1 基因在肺癌细胞中的表达可能影响某些转移相关基因的差异表达。 肺肿瘤 nm23-H1 基因 抑制消减杂交 cDNA文库 转移相关基因 【关键词 】 R734.2 DOI:10.3779/j.issn.1009-3419.2008.04.020 【中图分类号 】 Construction of the suppression subtractive cDNA libraries of human large cell lung cancer line L9981 before and after transfection with nm23-H1 gene * * * * ** # # # # YE Sujuan , FENG Zhihua , ZHU Wen , Cai Chunji , Li Lu , SUN Liya , WAN Haisu , Ma Li , ZHOU Qinghua * ** The State Key Laboratory of Biotherapy, Cancer center, West China Hospital, Sichuan University, Chengdu, Sich