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微生物学 第四节 微生物培养法概论 转鼓式自动固体培养装置这是以米为原料，米曲霉（ Asperigillus oryzae）固体培养生产日本酒曲的转鼓装置示意图。清洗、蒸煮、接种、固体翻松、水的喷淋、冷却、空气循环、过滤和排气等所有操作都在该装置上完成。 （5）厌氧手套箱（anaerobic glove box） 把含有还原剂的固体或半固体培养基装入试管中，经灭菌后，除表层上有一些溶解氧外，越是深层，其氧化还原势越低，故有利于厌氧菌的生长。 * * 一个良好的微生物培养装置的基本条件是：按微生物的生长规律进行科学的设计，能在提供丰富而均匀营养物质的基础上，保证微生物获得适宜的温度和良好通气条件（只有少数厌氧菌例外），此外，还要为微生物提供一个适宜的物理化学条件和严防杂菌的污染等。 微生物的培养方法可分为八个大类 实验室的微生物培养法 好氧培养法 厌氧培养法 好氧菌液体培养法 好氧菌固体培养法 厌氧菌固体培养法 厌氧菌液体培养法 试管液体培养 浅层液体培养 摇瓶培养 台式发酵罐 高层琼脂柱法 厌氧培养皿法 厌氧罐技术 厌氧手套箱技术 亨盖特滚管技术 试管斜面、平板 茄子瓶、曲盘 一、实验室培养法（一）固体培养法 1.好氧菌的固体培养 试管斜面（test-tube slant） 培养皿琼脂平板（agar plate） 克氏扁瓶（kolle flask） 茄子瓶 2.厌氧菌的固体培养 实验室中 培养厌氧菌 特殊的培养装置或器皿 配制特殊的培养基 六种营养要素 加入还原剂和氧化还原势的指示剂 （4）厌氧罐（anaerobic jar） （1）高层琼脂柱 （2）厌氧培养皿 （3）亨盖特滚管技术（hungate roll-tube technique） （5）厌氧手套箱（anaerobic glove box） 厌氧菌固体培养的具体方法  大多数微生物都是好氧菌，微生物一般只能利用溶于水中的氧，要保证在培养液中始终有较高的溶解氧浓度。 （二）液体培养法 1.好氧菌的液体培养 一般情况下（1大气压， 20℃ ）下，氧在水中的溶解度仅为6.2ml／L（0.28mmol），这些氧只能保证氧化8.3mg（即0.046mmol）葡萄糖，仅相当培养基中常用葡萄糖浓度的1‰。氧的供应始终是好氧菌生长、繁殖中的限制因子。 一般可通过增加液体与氧的接触面积或提高氧分压来提高溶氧速率，具体措施有： ① 浅层液体静止培养； ② 将三角瓶内培养物利用往复式或旋转式摇床（shaker）作摇瓶培养（shake-flask cultivation）； ③ 在深层液体培养器的底部通入加压空气，并用气体分布器使其产生均匀、密集的微小气泡； ④ 对培养液进行机械搅拌，并在培养器的壁上设置阻挡装置等。 （4）台式发酵罐（benchtop fermentor） （1）试管液体培养 （2）三角瓶浅层液体培养 （3）摇瓶培养 实验室中常用的好氧菌培养法 2.厌氧菌的液体培养 实验室中对厌氧菌进行液体培养时，保证培养基的氧化还原电位（Eh）降至-150mV～-420mV ，以适合严格厌氧菌的生长。 厌氧罐或厌氧手套箱 液体培养厌氧菌 不必提供额外的培养措施 单独放在有氧环境下培养 有机还原剂 加入能显著降低氧化还原电位的铁丝等 巯基乙酸、半胱氨酸、维生素C或庖肉等 加入 无机还原剂 用深层培养或同时在液面上封一层石蜡油或凡士林-石蜡油 二、生产实践中培养微生物的装置 （一）固体培养法 1.好氧菌的曲法培养 原始的曲法培养就是将麸皮、碎麦或豆饼等固态基质经蒸煮和自然接种后，薄薄的铺在培养容器表面，使微生物既可获得充足的氧气，又可利于散发热量，对真菌来说，还十分有利于产生大量孢子。 曲（qu或mouldy bran） 根据制曲的容器形状和规模的大小分类 瓶曲 袋曲（用塑料袋制曲） 盘曲（用木盘制曲） 帘子曲（用竹帘子制曲） 转鼓曲（用大型木质空心转鼓横向转动制曲） 通风曲（厚层制曲） 机械化程度和生产效率较高的现代化制曲技术，酱油酿造业广泛使用。 食用菌制种和培养 挂曲 小 曲 红 曲 近代人工踏制大曲 A whole process of DA-QU prepation 一般是由一个面积在10m2左右的水泥曲槽组成，槽上有曲架和用适当材料编织成的筛板，其上可摊一层约30cm厚的曲料，曲架下部不断通低温、湿润的新鲜过滤空气，制备半无菌状态的固体曲。 2.厌氧菌的堆积培养法 生产实践上对厌氧菌进行大规模固体培养的例子还不多见。在白酒生产中，一向用大型深层地窖对固态发酵料进行堆积式固态发酵，这对酵母菌的酒精发酵和己酸菌的己酸发酵等都十分有利，可生产名优大曲酒（蒸馏白酒）