裸小鼠和SCID小鼠整体模型在人癌临床实验研究中的应用.doc

裸小鼠和ＳＣＩＤ小鼠整体模型在人癌临床实验研究中的应用 为促进裸小鼠和ＳＣＩＤ小鼠整体模型用于人癌临床实验的研究，作者将１９９２年１０月至１９９５年９月三年间，于哈佛大学医学院、麻省总医院放射肿瘤学系、Ｅｄｗｉｎ　Ｌ．Ｓｔｅｅｌｅ放射生物学研究室，在Ｈｅｒｍａｎ　Ｄ．Ｓｕｉｔ教授的指导下，利用裸小鼠和ＳＣＩＤ小鼠所开展的主要研究作一综述 人脑多形性胶质母细胞瘤（ＧＢＭ）是中枢神经系统的一种高度恶性肿瘤，在美国每年约有三千新确诊病例。对ＧＢＭ患者，目前经手术治疗、手术联合放疗或化疗，能长期存活者也仅为５％，是对放射线极不敏感的肿瘤之一。故深入了解其生物学特征，提高临床疗效，是作者导师近年来感兴趣，并得到美国国家癌症研究基金资助的课题之一。现已有十多种人ＧＢＭ移植瘤在该室被建立及应用于实验性放疗研究。故作者所开展的第一项研究课题，是利用已建立了的裸小鼠人ＧＢＭ模型，对重组人肿瘤坏死因子α（ｒＨｕＴＮＦα）在整体内的抗ＧＢＭ效应，尤其是联合局部放疗后对该肿瘤的疗效及可能作用机制作了探讨［１］。 ?? 课题选用Ｕ８７人ＧＢＭ移植瘤为模型。因Ｕ８７已被证实为该室已建的ＧＢＭ系列中对放疗最不敏感的移植瘤，为较接近于临床实际的实验模型瘤株。实验共选用了１８６只７～８周龄的雄性ＮＣｒ／Ｓｅｄ裸小鼠，经５Ｇｙ全身照射（ＷＢＩ）的预处理后，将Ｕ８７移植瘤种植于实验鼠后腿中部皮下，当其体积生长达１１００ｍｍ３时，将带瘤动物随机分为单一ｒＨｕＴＮＦα注射及生理盐水对照组、局部放疗联合ｒＨｕＴＮＦα处理及生理盐水对照组。移植瘤的生长延迟、体积倍增时间（ＶＤＴ）、瘤组织坏死百分率及瘤细胞丢失系数（ｃｅｌｌ　ｌｏｓｓ　ｆａｃｔｏｒ）等作为评价ｒＨｕＴＮＦα抗肿瘤作用的指标。半数肿瘤控制剂量（Ｔｕｍｏｒ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　Ｄｏｓｅ　５０％，ＴＣＤ５０）作为终指标来判断局部放疗联合ｒＨｕＴＮＦα处理后的疗效。 ?? 结果显示：按１５０μｇ／ｋｇ体重剂量，每天１次，连续７ｄ给带瘤鼠腹腔注射ｒＨｕＴＮＦα，与对照组比较，其延迟Ｕ８７移植瘤的生长时间为８ｄ；其促使肿瘤ＶＤＴ显著增加（对照组：６．４ｄ，实验组１１．７ｄ，Ｐ＜０．０１）；瘤体积（对照组：６９９．７ｍｍ３，实验组３５１．１ｍｍ３，Ｐ＜０．０１）及实际瘤重（对照组：０．７４ｇ，实验组０．３８ｇ，Ｐ＜０．０１）均明显降低。瘤组织切片图像分析表明，其坏死面积的百分比呈显著增高（对照组：１５．９％，实验组３０．１％，Ｐ＜０．０５）。经流式细胞计数器分析表明，ｒＨｕＴＮＦα可导致瘤细胞的丢失系数增加２．３倍。采用单一剂量局部肿瘤放疗２４ｈ后，联合应用ｒＨｕＴＮＦα处理，结果显示该移植瘤的ＴＣＤ５０由６０．９Ｇｙ降低至５０．５Ｇｙ（Ｐ＜０．０１）。故实验证明了ｒＨｕＴＮＦα能通过其延迟移植瘤生长及增加瘤细胞丢失系数而发挥其抗肿瘤作用。局部放疗联合ｒＨｕＴＮＦα可产生对人ＧＢＭ移植瘤的协同杀伤作用，导致ＴＣＤ５０有统计意义地显著降低。 ?? 近年来，细胞凋亡（Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）这一在形态学、生物化学及其发生频率上均不同于坏死（Ｎｅｃｒｏｓｉｓ）的独特细胞死亡方式，这已被认为是多种人癌细胞对放射敏感的一种有意义反应。而ｐ５３基因编码的转录因子能对多种不同细胞活动起作用，包括细胞凋亡。故细胞表达其功能性ｐ５３蛋白的能力，也被认为可能是调控细胞对放射反应的决定因素。为进一步了解肿瘤放射敏感性的基本调控机制，课题以８种人癌裸小鼠移植瘤作为研究对象，分别比较了它们的放射敏感性（ＴＣＤ５０为评价指标）与其细胞凋亡及ｐ５３蛋白表达程度的关系。 ８种移植瘤包括：人脑ＧＢＭ４种，鳞状细胞癌２种，结肠腺癌和软组织肉瘤各１种。每种人癌分别接种２２至３３只裸小鼠，当肿瘤直径达８ｍｍ时，除对照组外，余肿瘤在接受３０或６０Ｇｙ局部放疗后１２、２４、４８及７２ｈ分别处死动物，取肿瘤组织作组织形态学及免疫组织化学研究，以检测瘤细胞的细胞凋亡及ｐ５３蛋白的表达。结果显示８种移植瘤的自发性细胞凋亡发生率为２．０％～６．６％。３０或６０Ｇｙ照射所诱发的细胞凋亡率分别为６．９％～１７．３％及８．９％～１８．５％。其中５种移植瘤有４种ｐ５３免疫组化染色呈阳性结果，２种为低或中度阳性反应，另２种为高度阳性。在ｐ５３阴性染色的瘤株中，３０或６０Ｇｙ照射未诱导其表达的变化。但照射却使ｐ５３阳性反应染色瘤株在观察时间范围内，其阳性程度明显降低。结果分析表明，８种人癌移植瘤的自发性与其诱发性细胞凋亡（经３０或６０Ｇｙ照射）发生率之间有显著性相关（γ＝０．７３，Ｐ＜０．０５及γ＝０．８４，Ｐ＜０．０１）；而且自发性细胞凋亡与其ｐ５３染色表达程度也是呈显著性相关（γ＝０．７０，Ｐ＝０．０５），即自发性细胞凋亡率高者，其ｐ５３蛋白染色呈阴性或仅弱阳性反应。进一步分析表明，８种