神经元发育与退行性病变的分子细胞遗传机制.docVIP

自然科学基金申请书 项目名称： 神经元发育与退行性病变的分子细胞遗传机制 申 请 者： 所在单位： 川北医学院 邮政编码： 637000 通讯地址： 南充市顺庆区涪江路234号 电 话： 传 真： 0817-2340136 申请日期： 2011年12月 一、研究内容 主要研究内容: （1）Rheb/mTor信号通路在神经元发生、极化、网络化及神经退行性病变中的作用及分子机制： 体外研究发现，mTOR信号通路对神经元的发生、发育起重要作用，而Rheb处于mTOR蛋白上游并对其起正调节作用，前期工作发现，Rheb1敲除小鼠的大脑发育出现明显异常。我们的初步研究表明小鼠中mTOR的激活需要与神经元早期发育密切相关的Rheb1。 Nestin-Cre介导的神经前体细胞敲除Rheb1导致小鼠大脑体积和重量均减少约50%。基于上述，我们计划深入研究Rheb/mTOR信号通路在神经元发生阶段作用和机制。预计本课题将帮助我们阐明Rheb1/mTOR信号通路在神经元发生作用和机制，为相关疾病的防治提供理论基础。 （2）与铁离子代谢相关基因在神经元发生、极化和网络化中的作用及分子机制： 研究结果表明，铁离子与神经元的发育密切相关，但其分子机理尚不清楚。为深入研究铁离子和铁转运蛋白在脑神经发育中的分子机理，我们将在神经前体细胞中敲除铁离子运输基因包括铁转运蛋白受体（Transferrin Receptor，TFR）、二价金属转运体（DMT1）和运铁素（Ferroportin，Fpn或SLC40A1)。 铁转运蛋白受体主要摄取转铁蛋白结合铁（Transferrin-bound iron，Tf-Fe），二价金属转运体主要摄取非转铁蛋白结合铁（Non-Transferrin-bound iron，NTBI），而运铁素在机体内唯一具有从细胞内泵出铁离子的蛋白。这三个基因涵盖了细胞摄取和泵出铁离子的主要通路。通过本课题的研究我们将确定铁离子转运在神经元发生过程中的作用和机理，为防治铁离子代谢失调引起的神经性疾病奠定基础。 并且体外试验已经表明Numb调节神经元的极化。铁离子、转铁蛋白与内吞调节蛋白Numb共同参与内吞功能，但在脊椎动物中还未有遗传学证据证明这些分子介导的内吞调节神经元的极化。本课题将以这些基因敲除小鼠为模型，运用多种前沿生物学技术阐明中枢神经系统神经元摄取、泵出铁离子的通路和内吞调节蛋白Numb/Numblike在神经元极化中的作用及分子机制。课题的研究将确定TFR、DMT1、Fpn、numb和numblike信号通路是否是神经元极化所必需的，同时将为进一步揭示它们调控神经元极化的分子机制，为相关疾病的防治提供新的途径。 （3）研究Gsα在神经元极化中的作用及分子机制： 我们的前期工作表明异三聚体G蛋白的亚基Gs?调节神经前体细胞的不对称性分裂和细胞极性，Emx1-cre介导的在大脑的神经前体细胞中敲除Gs?导致大脑的重量减轻50%和产后月内死亡。虽然我们已在Gs?介导对神经前体细胞不对称细胞分裂的调控方面取得显著进展（被资助），最近体外和遗传学研究提示Gs?还有可能参与神经元极化的调节，但其中的机理尚待研究。通过本课题的研究将确定Gs?信号通路是神经元极化所必需的，并进一步揭示Gs?信号通路调控神经元极化分子机制。 （4）BDNF在神经元网络化中的作用及分子机制： BDNF几乎在神经元的各个发育阶段都具有重要功能。其基因突变Val66Met导致它在神经元内活性诱导分泌缺陷，因而造成精神疾病，但是具体的分子机制还不清楚。 为此我们建立了BDNFmet转基因小鼠模型。 此模型真实反映BDNFmet相关精神疾病的行为特点。预计本课题的研究将确定BDNFmet在树突和树突棘形成中作用和分子机制，及对神经传递的调节，进一步深化理解BDNFmet诱导精神疾病的发生病理及环境因素对BDNFmet精神疾病的影响，发现治疗BDNFmet诱导精神疾病的介入方式。 （5）线粒体自噬在神经元发育和退行性病变中的功能及调节机制： 线粒体自噬是细胞控制线粒体数量和清除受损线粒体的唯一途径。线粒体自噬不足会导致受损线粒体的积累，引起细胞凋亡；而线粒体自噬过量会导致ATP水平下降，引起细胞的自噬性死亡。由于神经元对线粒体的正常运行具有特别高的要求，它们必须具备精细的线粒体自噬调节机制，以将它控制在适当水平。在本课题中，我们将运用细胞筛选方法分离线粒体自噬的促进因子和抑制因子，通过研究它们的生化功能，揭示线粒体自噬特有的调节方式。进一步通过研究它们在神经