Multiskan GO应用大全20140430.pdf

Thermo Fisher Multiskan GO 全波长酶标仪应用 Multiskan GO 全波长酶标仪波长范围从 200nm 到 1000nm，采用新一代光栅作为分光元 件，可实现任意波长下的测量。它的应用范围极广，实现几乎所有光吸收检 。除了大家所 熟悉的 ELISA 酶联免疫技术在临床、食品安全、动植物疫病等的广泛应用以外，Multiskan GO 全波长酶标仪在细胞生物学、蛋白与核酸检 、及其它诸多领域均有广泛的应用。本文着重 介绍 Multiskan GO 在 ELISA 检测以外的各种应用，以期将其功能发挥得淋漓尽致。 第一部分 细胞学检测的应用 1. 细胞增殖/细胞毒性 细胞增殖及毒性检测是基本的细胞生物学检测技术，广泛用于体外评价新药、化妆品等 的生物毒性，同时也用于实验室内评价抗肿瘤药物的疗效。测定的结果常用有效剂量 ED50 表示，检测方法包括 MTT， CCK8/WST-8 等。 1) MTT 法 ◆ 检测原理： MTT 可以被线粒体内的脱氢酶还原为结晶状的深紫色产物(Formazan)并沉积在细胞 内，死细胞无此功能。加入 DMSO 后，能完全溶解结晶产物。通过测定 570nm 波长处 的吸光值，可间接反映活细胞的数量。 细胞增殖越多越快，则吸光值越高；细胞毒性越大，则吸光值越低。 ◆ 检测波长： 570nm 说明：尽管 MTT 检测的最佳吸收波长为 570nm，但对于普通的滤光片式酶标仪，该波 长不是标配的滤光片，因此，也可用 490nm 的滤光片来检 。 2) CCK8 法 ◆ 检测原理： 在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙 黄色的甲臜产物 （formazan ）。颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。 间接反映活细胞数量。 CCK 法应用非常广泛，如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验 以及生物因子的活性检测等。 ◆ CCK 方法的优势： i) 表 1 CCK 法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较 检测方法 MTT 法 CCK 法 甲臜产物的水溶性 差 （需加有机溶剂溶解再检 ） 好 检测灵敏度 高 高 检测时间 较长 最短 检测波长 560-600nm 430-490nm 细胞毒性 高，细胞形态完全消失 很低，细胞形态不变 试剂稳定性 一般