纳米氧化锌对小鼠黑色素瘤细胞(B16)毒性和代谢的研究.pdfVIP

纳米氧化锌对小鼠黑色素瘤细胞（B16）的毒性和代谢的研究 中文摘要 中文摘要 纳米氧化锌颗粒 （ZincOxidenanoparticles，ZnONPs），是近年来在生产工艺 和检测方法上最为成熟的纳米材料之一，它的独特的颜色效应、光催化作用及散 射和吸收紫外线的能力，使其成为一种倍受人类青睐的纳米材料，越来越广泛的 应用于人们的生产生活当中，因此对于其生物安全性的研究势在必行。然而总结 近年来对于纳米材料的安全性评价工作的进展发现，对于人们现今应用较广的 ZnO纳米材料的生物安全性研究较少。另一方面，有研究表明ZnONPs可能进入 皮肤，有帮助治疗皮肤疾病，所以我们的研究重点是ZnONPs对皮肤中的黑素瘤 细胞所产生的细胞生物效应，看其是否会对黑素瘤细胞产生不可逆转的损伤，并 从细胞凋亡的机理上分析ZnONPs损伤细胞的机制以及是否对黑素瘤细胞分化产 生影响，并从基因水平上分析ZnONPs影响细胞分化的机制，为评价ZnONPs 在 皮肤疾病治疗和化妆品方面的应用提供数据。首先使用X 射线衍射（X-ray diffraction，XRD）、透射电子显微镜 （Transmissionelectronmicroscope，TEM）、 电动电位（Zetapotentia ）对实验中所使用的不同粒径ZnONPs进行详尽表征，为 类似的研究工作提供了一套标准的材料表征方法。以小鼠黑素瘤细胞 （B16）为细 胞模型，研究了15nm、30nm、90nmZnO对B16细胞的体外细胞生长和代谢的 影响作用及其作用机制。以不加纳米氧化锌和加体相氧化锌的处理结果分别作阴 性和阳性对照。结果发现，15nm、30nm、90nmZnO在2～16μg/m 浓度下与 B16 细胞共培养作用72h后，在4μg/m 以下，ZnONPs并未明显抑制细胞生长， 引起细胞死亡。当作用浓度大于8μg/m 时，明显抑制细胞生长。随ZnONPs浓 度的增加，细胞体积变小，细胞间隙变大，粘附性降低，细胞变圆，从培养瓶底 脱落死亡。倒置显微镜、电镜切片实验观察以及流式细胞仪检测等实验手段定性 和定量研究了ZnONPs 对小鼠黑色素瘤细胞凋亡影响。实验中使用碘化丙啶 （propidiumiodide，PI）对细胞单一染色，并用流式细胞仪检测发现15nmZnO作 用细胞24h后，凋亡细胞的数量为11.79%，明显高于正常对照组0.57%。DNA琼 脂糖凝胶电泳和彗星实验得到了类似的结果，DNA受损。另外丙二醛 （malondi- I 中文摘要 纳米氧化锌对小鼠黑色素瘤细胞（B16）的毒性和代谢的研究 aldehyde，MDA)含量和活性氧水平检测实验中发现ZnO-NPs 的刺激可以使细胞产 生大量脂质过氧化物和活性氧，致使细胞产生氧化损伤，导致细胞经历线粒体介 导的内源途径凋亡死亡。另一方面，由胞外实验得出结果，ZnONPs 和体相ZnO 在 细胞外对蘑菇酪氨酸酶的活性和多巴的氧化都没有显著性影响。而ZnONPs诱导 细胞中酪氨酸酶（Tyrosinase，TYR）、酪氨酸相关蛋白1（Tyrosinase-relatedprotein 1，TYRP-1）、酪氨酸相关蛋白2 （Tyrosinase-relatedprotein2，TYRP-2）的mRNA 的表达量升高，导致细胞内酪氨酸酶活性水平增高，最终导致细胞内黑色素生成 含量升高。相同浓度下，粒径15nmZnONPs 比30nm、90nm 尺寸的ZnONPs 作用明显。所以推断其作用机制可能是ZnONPs通过影响酪氨酸酶、酪氨酸酶相 关蛋白的基因表达进而影响酪氨酸酶活性进而影响黑色素生成。所以我们认为15 nm、30nm、90nm纳米ZnO在浓度大于8μg/m 可以抑制B16细胞的增殖，增 加细胞凋亡，影响了B16黑素瘤细胞的代谢，粒径越小作用越强。 关键词：纳米ZnO；小鼠黑色素瘤细胞；生长；酪氨酸酶；黑色素；代谢 作 者： 霞 指导教师：许维岸