胃癌Runx3基因表达及甲基化、去甲基化对其影响基础及临床的研究.pdf

中文摘要 动物Runt家族进化的基础，其定位于人染色体1号短臂lp36上。Runt 的发生密切相关。Runx3含有2个高度保守的CpG岛，其中一个大的 CpG岛富含有GC启动子的特征，它位于Runx3基因启动子P2周围， Growth 能够控制Runx3基因的转录。转化生长因子(Transforming Factor beta，TGF．p)是许多细胞的有效抑制因子，其信号紊乱将导致 许多肿瘤的发生。近年来研究发现，Runx蛋白可以指导TGF．13信号 转导过程中激活的Smad复合物从细胞质内转入细胞核内特定的靶位 点，加强Smad复合物与靶位点的结合强度并激活靶基因，从而对细 胞的分化、细胞周期调控、凋亡和恶性转化起作用。目前研究发现消 化道肿瘤如胃癌、胆管癌、胰腺癌和肝细胞癌中均有染色体lp36异 常。因此作为一种新的候选肿瘤抑制基因，Runx3正在受到越来越广 泛的关注。 有研究结果发现Runx3基因对胃癌细胞的生长有明显的抑制作 用，并能阻止其在裸鼠体内的致瘤性。而敲除掉Runx3基因则会使 鼠胃粘膜发生异常增生。用原位杂交技术发现在人正常胃粘膜上皮细 胞存在Runx3基因的表达，而大约60％的胃癌组织中Runx3基因失 活，而且与胃癌的分期有关。因此，有人认为Runx3基因是一种薪 发现的抑癌基因，在胃癌的发生发展过程中起着重要作用。据此，本 研究以手术切除的胃癌及正常组织、胃癌细胞株SGC一7901以及荷瘤 裸鼠为研究对象，应用细胞培养、动物实验、免疫组织化学、病理形 态学观察、逆转录一多聚合酶链反应(Reverse TranscriptionPolymerase Chain PCR,MSP)等方法，对胃癌及正常组织、胃癌 (Methylation．Specific 细胞株以及荷瘤裸鼠瘤组织中Runx3基因的mRNA表达和功能变化 及甲基化状态，并用去甲基化药物5．Aza．CdR对Runx3基因启动子 区域甲基化状态进行干预观察处理后该基因mRNA表达情况及裸鼠 体内成瘤性进行研究，旨在探讨胃癌组织中Runx3基因的特异性表 达改变及其启动子区域甲基化状态与胃癌发生、发展的关系以及 Runx3基因作为候选的抑癌基因在胃癌基因治疗中的作用和机制，为 中文摘要 胃癌患者早期特异性诊断和预后判断及去甲基化药物干预治疗提供 客观的观察指标，并为开展胃癌的基因治疗提供理论和动物实验基 础。 第一部分 胃癌组织中Runx3蛋白表达与其临床生物学行为关系的 研究 常组织中的表达及其意义，探讨Runx3在胃癌组织中的异常表达及 其表达与胃癌临床生物学行为之间的关系。 方法：采用免疫组化过氧化物酶标记链霉卵自素法(SP)对50 例胃癌组织及5cm以外的正常组织中Runx3的表达进行检测并结合 患者的年龄、性别、肿瘤大小、部位、分化程度、组织学类型、淋巴 结转移等临床病理因素进行综合分析。 结果：Runx3蛋白免疫阳性产物为棕黄色，Runx3蛋白阳性着色 定位于细胞核。Runx3蛋白在胃癌中低表达，其阳性率分别为42．00％ (21／50)，并与肿瘤的分化程度呈反比，高、中分化癌，其Runx3蛋 蛋白在正常组织中高表达，正常组织内阳性率为93．33％(28／30)，正 常组织与癌组织的Runx3蛋白的阳性率差异有显著性(尸0．05)。 Runx3蛋白的表达与患者的性别、肿瘤大小等因素均无关(p0．05)。 结论：Runx3蛋白在胃癌组织中呈阴性或弱阳性表达而在正常组 织中呈现强阳性表达；经临床病理资料分析认为Runx3蛋白在胃癌 组织中低表达状态和肿瘤的分化程度、淋巴结转移密切相关，而与性 别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、浸润深度、大体分型、TNM分期 无统计学相关性。在低分化肿瘤和伴有淋巴结转移的胃癌组织中 Runx3蛋白呈现明显低表达状态；Runx3基因可能作为抑癌基因对胃 癌发生有负性调节作用，Runx3基因的表达异常及缺失会导致胃癌的 侵袭性增高和淋巴结转移。 第二部分 胃癌中Runx3mRNA和蛋白的表达及其基因启动子甲基 中文摘