第2章：模式生物的.ppt

第二章：细胞周期的模式生物及分析方法;真核生物具有十分相似的细胞周期调控机制;第一节 酵母;一、芽殖和裂殖酵母的生活周期;芽殖酵母 Saccharomyces Cerevisiae;裂殖酵母 Schizosaccharomyces pombe;特点：;二、 酵母中细胞周期调控的遗传分析 ;4，条件性突变;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;cdc16突变体：短的后期前纺锤体，染色体没有分离。当然出芽和芽体的生长不受影响 cdc15突变体：有丝分裂后期发生阻滞，染色体已分离，后期纺锤体拉长。胞质分裂没有完成;第二节 爪蟾 Xenopus Laevis;尺寸巨大：非洲蟾蜍的受精卵，直径为1毫米，很容易注射一些测试药物，以检测它们对细胞周期进程的影响。 无细胞体系的构建：这些受精卵中还可以分离出较纯的细胞质，在试管中重建众多细胞周期事件。;早期胚胎细胞周期的试管重建;爪蟾囊胚前期细胞中存在自主性的细胞周期振荡或生物钟，即使去除细胞核而使细胞周期事件严重受损，该生物钟依然能按正常时序运转 ;第三节 黑腹果蝇Drosophila melanogaster;一、简化的果蝇早期胚胎细胞周期;二、间期在胚胎发生后期才出现;第一个G1期的出现是在第17个周期。胚胎的大部分细胞停滞在这一时间点并最终进入一个特化的核内复制循环，这个过程中它们经过多轮的DNA复制而不发生有丝分裂。 在有些胚胎中，G1期停滞的上皮细胞程序性地进入不同的命运：成为成虫细胞，能够发育成成体果蝇的主要构造。;三、成体果蝇结构发育自成虫细胞;第四节 哺乳动物的细胞周期分析 ;原代细胞在培养中有着有限的增殖生活周期：例如，人的原代细胞，体外培养到25到50次分裂后停止分裂，很多啮齿目细胞类型甚至在更少的分裂次数后就停止分裂这种细胞周期停滞称为复制老化。;细胞衰老的两个普遍机制： ;当细胞在体外培养环境中生长很长一段时间，群体中的细胞会积聚自发的突变以防止衰老，因而产生了永生化的细胞系。 转化的细胞系积累了大量的遗传损伤，不仅导致了永生化，也破坏了那些正常限制细胞增殖速率的调控系统。当将它们注射入小鼠体内时，能形成肿瘤。这些细胞用于研究正常的细胞增殖调控并不理想，但是对于直接分析癌症表型下所存在的分子缺陷却非常有用。;二、研究哺乳动物细胞蛋白功能的方法;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;Photo-activation and CALI: The perturbation of molecular function within single cells;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;Fluorescence resonance energy transfer (FRET): assessing intramolecular association in vivo;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;第五节 细胞周期分析方法;荧光标记：周期特异蛋白质、DNA;FACS：DNA含量;细胞同步化;1）有丝分裂选择法：M期细胞与培养皿的附着性低，振荡脱离器壁收集。 优点：操作简单，同步化程度高，细胞不受药物伤害。 缺点：获得的细胞数量较少（分裂细胞约占1%～2%） 。 2）细胞沉降分离法： M期细胞体积大，可用离心分离。 优点：可用于任何悬浮培养的细胞。 缺点：同步化程度较低。;3，DNA合成阻断法：选用DNA合成的抑制剂，可逆地抑制DNA合成。常用TdR双阻断法： 在细胞处于对数生长期的培养基中加入过量TdR。S期细胞被抑制，停在G1/S交界处。移去TdR，释放时间大??TS时，再次加入过量TdR。;4，中期阻断法 用秋水仙素等细胞分裂抑制剂将细胞阻断在中期。优点是无非均衡生长现象，缺点是可逆性较差。 5，FACS分选 ;Evaluation only. Created with Aspose.S