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XPD基因多态性及辐射致染色体损伤关系 　【摘要】 目的 探讨人类着色性干皮病基因D(XPD基因)751位点、312位点多态性与电离辐射损伤效应之间的相关性，为筛检电离辐射高危人群提供生物学指标。方法 应用病例对照研究方法，以唐山市所有从事射线工作的人员为对象，选择有染色体异常的放射人员182人为病例组，以无辐射损伤182人为对照组，进行1∶1配对。染色体分析采用微量全血培养法，XPD基因751，312位点基因型检测采用聚合酶链反应限制性片断长度多态性(PCRRFLP)分析。结果 XPD 751位点野生型AA与突变基因型(包括突变杂合子AC和突变纯合子CC)在病例组与对照组之间差异有统计学意义，病例组野生基因型频率高于对照组(OR=190，95% CI=110～328，Plt;005)。结论 XPD 751位点基因多态性与辐射致染色体损伤有关联，751位点野生基因型AA是辐射致染色体损伤的危险因素。 【关键词】 电离辐射 　　随着射线与辐射技术应用的愈来愈广，职业接触人数不断增加，电离辐射及其对机体的损伤引起人们广泛关注。辐射可导致具有严密超螺旋结构的DNA发生链断裂，断片游离，使染色体发生各种畸变。辐射导致的生物学效应除与暴露射线的种类、剂量、受照方式、辐射品质等因素有关外，还与机体对损伤的修复功能密切相关。研究报道，健康人群中辐射敏感性的显著不同，其根源可能在于DNA修复酶的基因多态性〔1，2〕。本研究采用1∶1病例对照研究方法，分析2组人群的人类着色性干皮病基因(XPD)等位基因分布频率，探讨XPD基因多态性与辐射损伤易感性的关系，为寻找个体对电离辐射易感的分子标志物提供依据。 　　1 对象与方法 　　11 对象 以唐山市所有从事射线工作的人员为对象(即利用射线装置从事医学检查、治疗、工业探伤、食品处理等领域的工作人员1457人)，在全面健康体检的基础上，选择有染色体异常的放射人员182人为病例组，同时以年龄相差不超过5岁、同性别、同民族、同工作单位、同工种、累积工龄相差不超过1年，累积受照剂量相同且无辐射损伤的放射人员为暴露对照组，进行1∶1配对。 　　12 现场调查 采用统一的调查表，对研究对象进行面对面调查。内容包括基本情况、疾病史、接触有毒有害物质情况、吸烟情况及生活习惯等。根据《放射人员登记表》详细摘录工种、工龄、累积受照剂量及职业变动史。现场采集静脉血5ml，取05ml加质量分数2%乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)抗凝，进行实验室检查。 　　13 染色体分析 采用微量全血培养法，取静脉血05ml,加入含有20%小牛血清的RPMI1640培养基培养54h，收获前4～6h加入秋水仙素，常规制片，姬姆萨染色，油镜下观察200个分散良好的中期分裂相，统计有畸变的细胞数，计算细胞畸变率。观察的染色体畸变类型包括双着丝粒染色体、断片、微小体、环状染色体。观察的细胞中染色体出现任何一种畸变记为异常，一个细胞中出现1条或1条以上染色体畸变均记为1个畸变细胞。 　　14 XPD基因检测 盐析法提取DNA。采用聚合酶链反应限制性片断长度多态性(PCRPFLP)方法分析XPD基因751、312位点基因型分布情况。PCR引物序列分别为5′TCAAACATCCTGTCCCTACT3′和5′CTGCGATTAAAGGCTGTGGA3′，5′TGACCGGTGCCAGGGCAACC3′和5′GGACACGGCTCTGCATAACC3′。反应体系为25μl，含01μg模板DNA、10μmol/L上下游引物，25mmol/L dNTPs，25mmol/L MgCl2,10U TaqDNA聚合酶及10×Buffer。反应条件：751位点为94℃预变性3min、94℃变性1min、58℃退火30s，72℃延伸30s为一个循环，共扩增35个循环，结束后于72℃延伸5min；312位点为94℃预变性30min、94℃变性1min、60℃变性1min、72℃延伸50s为一个循环，共扩增35个循环，结束后于72℃延伸6min。各取PCR产物5μl，加入限制性内切酶Pst Ⅰ或Sty Ⅰ置37℃水浴消化4h。用25%琼脂糖凝胶电泳分析酶切产物。XPD751位点基因型：野生型纯合子(Lys/Lys)为234bp和110bp，杂合子(Lys/Gln)为234，171，110和63bp，突变型纯合子(Gln/Gln)为171，110和63bp。XPD312位点基因型：野生型纯合子(Asp/Asp)为604bp，杂合子(Asp/Asn)为640，485，119bp，突变型纯合子(Asn/Asn)为485，119bp。 　　15 统计分析 用Excel建库，SAS 612统计软件进行分析；定量资料进行1∶1配