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SPEHPLC法测定小柴胡片中柴胡皂苷a含量 　 【摘要】 目的 建立小柴胡片中柴胡皂苷a的含量测定 方法 。方法 采用HPLC法，以固相萃取进行样品前处理，以Kromasil 5 C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）为色谱柱；以甲醇水（体积比75∶25）为流动相；检测波长为203 nm。结果 柴胡皂苷a的线性关系良好，回归方程：A=358.09m-7.6102，r=0.9991；平均加样回收率98.2%，RSD为1.92%。结论 采用固相萃取能够有效消除杂质对柴胡皂苷a含量测定的 影响 ；本法操作简便，重复性好，回收率高，可作为小柴胡片质量控制的有效方法。 【关键词】 小柴胡片；柴胡皂苷a；高效液相色谱法；固相萃取 　　柴胡片收载于 中国 药典2005年版一部中，由柴胡、半夏、黄芩等七味药组成，具有解表散热、疏肝和胃之功效，用于 治疗 外感病、邪犯少阳证有较好疗效。中国药典中以黄芩、甘草的TLC鉴别和黄芩苷的含量测定来控制本品的质量［1］，而对于本品中的君药，用量最大并起主要作用的柴胡却没有质量控制指标。 　　柴胡中柴胡皂苷a具有抗炎、调节免疫等作用［2］，是小柴胡片治疗外感病，邪犯少阳证的物质基础。因此，建立本品中柴胡皂苷a的含量测定方法，有助于更好的控制本品的质量。但柴胡皂苷a的紫外吸收波长在203 nm，处于紫外末端，在测定时受杂质干扰严重。固相萃取（SPE）是一种新的样品前处理技术，近年来已经 应用 于中药含量测定方法 研究 ［3-5］，但还未见有将此方法应用于柴胡皂苷a的含量测定的 文献 报道。本文采用这种样品前处理技术，有效地消除了本品中杂质对柴胡皂苷a测定的影响，保证了测定结果的准确性，具有操作简便，节约时间，回收率高的优点，可用于小柴胡片的质量控制。 　　1 仪器与试药 　　Agilent 1100 Series高效液相色谱仪（Agilent Technologies,USA），Agilent Chem Station 4.0 色谱工作站；Supelclean ENVI18 SPE C18小柱（500 mg/3 mL，美国），Satorius 电子 分析 天平（Sartorius Co.Ltd.Germany）；艾科普纯净水发生器。甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余所用试剂均为分析纯。 　　柴胡皂苷a对照品（批号：110777-200301，供含量测定用）购至中国药品生物制品检定所。小柴胡片（A厂，070102，070205，070408）。 论文代写 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件与系统适用性 　　以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，Kromasil 5C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以甲醇水（体积比75∶25）为流动相；流速为0.8 mL/min；检测波长为203 nm。 理论 塔板数按柴胡皂苷a峰 计算 应不低于5000。对照品图谱、样品图谱、阴性对照图谱见图1。 　　A.柴胡皂苷a对照品； B.小柴胡片； C.阴性对照 1.柴胡皂苷a 　　图1 HPLC色谱图（略） 论文代写 　　Fig.1 HPLC chromatograms 　　2.2 对照品溶液的制备 　　精密称取柴胡皂苷a对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，摇匀，即得。 　　2.3 供试品溶液的制备 　　取小柴胡片20片，研细，混匀，取约4 g，精密称定，加5%（体积分数）氨水甲醇60 mL，回流提取2次，合并2次提取液，滤过。水浴挥干，残渣加水10 mL溶解，加水饱和正丁醇萃取4次，每次20 mL，合并正丁醇液，加氨试液洗涤2次，每次20 mL，弃去氨洗液。正丁醇液蒸干，残渣加水5 mL使溶解，加于已处理好的C18微柱（先用甲醇10 mL冲洗，再用水10 mL冲洗）上，分别用水10 mL，80%(体积分数）甲醇20 mL洗脱，收集80%（体积分数）甲醇洗脱部分，蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。 　　2.4 线性关系考察 　　精密吸取上述对照品溶液8、10、12、16、20、25、30 μL，注入液相色谱仪，测定。以峰面积(A)为纵坐标，以进样量(m)为横坐标，进行线性回归，得回归方程：A=358.09m-7.6102，r=0.9991。结果表明，在4.02～15.06 μg 范围内线性关系良好。 毕业论文 　　2.5 稳定性试验 　　取同一份供试品溶液，分别在0，2，4，8，12，24 h注入液相色谱仪，测定,结果峰面积的RSD为1.05%,表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。