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三氯化铝比色法测定中药总黄酮方法探析 　 作者：马陶陶 张群林 李俊 孟晓明 黄成 陈玉璞 【摘要】 　　目的探讨以芦丁作为对照品，采用三氯化铝（ＡｌＣｌ３ ）比色法测定中药总黄酮含量的专属性，并建立ＡｌＣｌ３比色法测定中药总黄酮含量的最优条件。方法通过对几类典型结构的黄酮类及多酚类化合物ＡｌＣｌ３显色前后的吸收峰（２００ ～６００ ｎｍ）进行比较，分析以芦丁为对照品的ＡｌＣｌ３ 比色法测定中药总黄酮的合理性。结果ＡｌＣｌ３ 显色后，部分黄酮类物质在４２１ ｎｍ 处有较强吸收。结论采用ＡｌＣｌ３ 比色法测定中药总黄酮的含量具有合理性，并建立了ＡｌＣｌ３ 比色法测定中药总黄酮含量的最优条件。 【关键词】 ＡｌＣｌ３ 比色法 总黄酮 芦丁 　　Abstract：ObjectiveＴｏ ｄｉｓｃｕｓｓ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉａｌｉｔｙ ｏｆ ＡｌＣｌ３ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙ ｗｉｔｈ ｒｕｔｉｎ ａｓ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ ｆｏｒ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ on ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ａｎｄ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ＡｌＣｌ３ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙ．MethodsTo mａｋｅ ａ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ａｎｄ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ ｗｉｔｈ ｔｙｐｉｃａｌ structure ｗｉｔｈ ＡｌＣｌ３ ａｎｄ measure ｔｈｅｉｒ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｃｕｒｖｅｓ ａｔ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ２００ ～６００ ｎｍ．ResultsＡｔ ｔｈｅ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｏｆ ４２１ ｎｍ，ｓｏｍｅ flavonoid-like compounds showed ｔｈｅ ｓｉｍｉｌａｒ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｒｕｔｉｎ ．ConclusionＩｔ ｉｓ ｒｅａｓｏｎａｂｌｅ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ the ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ＡｌＣｌ３ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙ ｗｉｔｈ ｒｕｔｉｎ ａｓ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ ａｎｄ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ＡｌＣｌ３ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙ． 　　Key words：ＡｌＣ３ cｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙ； Ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ； Ｒｕｔｉｎ 　　黄酮类化合物（Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ）是以Ｃ６ －Ｃ３ －Ｃ６ 结构为基本母核的色原烷或色原酮的衍生物，以其广泛的药理作用倍受青睐，而中药材中总黄酮的含量测定成为近年来研究黄酮化合物所关注的焦点。中药总黄酮的含量测定一般采用比色法、高效液相色谱法等［１］ 。比色法是被《中国药典》所采用的最常见的总黄酮测定方法，其中又以ＮａＮＯ２ －Ａｌ（ＮＯ３ ）３ －ＮａＯＨ 比色法常用［２］ 。这种方法以ＮａＮＯ２ －Ａｌ（ＮＯ３ ）３ 为显色剂，在碱性条件下，利用其与黄酮物质生成红色铝螯合物为特征，以芦丁为对照，在５１０ ｎｍ 处测定吸光度，从而得到待测物质总黄酮的含量。郭亚建等［３］ 曾对这种方法的专属性进行了讨论，发现具有邻二酚羟基的非黄酮类物质在芦丁显色的最大波长处（５１０ ｎｍ 左右）也有较强吸收，而黄酮类成分黄芩素、山柰酚在此波长处没有吸收，从而说明采用ＮａＮＯ２ －Ａｌ（ＮＯ３ ）３ －ＮａＯＨ 比色法，以芦丁作为对照，不能排除非黄酮类物质的干扰，这种方法测定中药总黄酮含量的专属性不强。 　　因此，本实验采用另一种常用的比色法：ＡｌＣｌ３ 比色法，对几类典型结构的黄酮类化合物（芦丁、儿茶素、木犀草素、鼠李素、山柰奈酚、槲皮素、葛根素、金丝桃苷、橙皮苷）及多酚类化合物（２，３ －二羟基苯甲酸，绿原酸，和厚朴酚，阿魏酸）ＡｌＣｌ３ 显色前后的吸收峰（２００ ～６００ ｎｍ）进行比较，分析以芦丁为对照品的ＡｌＣｌ３ 比色法测定中药总黄酮的合理性，并对芦丁显色的ｐＨ 值，ＡｌＣｌ３ 浓度、显色温度等条件进行优化研究。 　　1 仪器与试药 　　Ａｇｉｌｅｎｔ ８４５３ 紫外分光光度计；ＰＨＳ －３Ｃ 精密ｐＨ 计（上海雷磁仪器厂）。 　　试剂：芦丁，葛根素，２，３ －二羟基苯甲酸，绿原酸，和厚朴酚，阿魏酸，儿茶素，木犀草素，异鼠李素，山柰奈酚，槲皮素，金丝桃苷，蒙花苷、橙皮苷均购自中国药品生物制品检定所。三氯化铝，醋酸钠，冰醋酸，甲醇均为分析纯，水为双蒸水。 　　2 方法 　　2.1 供试品的制备以芦丁为例，精密称取芦丁标准品（１２０ ℃ 烘干至恒重）１０．０ ｍｇ，甲醇定容至５０ ｍｌ，配成０．２ ｍｇ／ｍｌ 的芦丁母液。 　　2.2 显色试剂的配置精密称取ＡｌＣｌ３１．３４ ｇ，甲醇定容至１００ｍｌ，