高中生物-6.2-DNA片段的扩增-PCR技术课件-中图版选修1.pptVIP

DNA分子双螺旋结构模型提出之后，人们又去探究DNA是如何传递遗传信息的。当时推测可能有如图A所示的三种方式。1958年，Meslson和Stah 1用密度梯度离心的方法，追踪由15N标记的DNA亲本链的去向，实验过程是：在氮源为14N的培养基上生长的大肠杆菌，其DNA分子均为14N—DNA(对照)，在氮源为15N—DNA的培养基上生长的大肠杆菌，其DNA均为15N—DNA(亲代)，将亲代大肠杆菌转移到含14N的培养基上，再连续繁殖两代(子代Ⅰ和子代Ⅱ)后离心得到如图B所示的结果。 能力展示 * 第二节　DNA片段的扩增——PCR技术 课程标准 尝试PCR技术的基本操作和应用。 课标解读 1．简述PCR技术的原理和用途。 2．简述PCR技术的基本操作步骤。 3．进行DNA片段的PCR扩增。 (1)解旋 在_______的作用下解开DNA双链。 (2)合成引物 在____________的作用下，以_________为模板，合成一段RNA引物。 PCR的原理和过程 1．DNA的复制 解旋酶 RNA聚合酶 DNA单链 (3)合成子链 以_________为起点，在___________的作用下，以______ _________为原料，按照______________原则合成两条新的DNA子链。 (1)PCR的定义 DNA体外扩增技术实际上是在体外模拟_______________ ____过程，形成大量_________________，这个反应过程称为_______________，简称PCR。 (2)PCR与DNA复制的不同点 2．PCR技术 RNA引物 DNA聚合酶 四种脱 碱基互补配对 细胞内的DNA复 特异性的DNA片段 聚合酶链式反应 氧核苷酸 制 PCR DNA复制 引物 人工合成的__________或RNA，其长度通常为___________________ RNA 解旋 通过对_______________来实现的 解旋酶 (1)准备：将PCR缓冲液、_________、 _________ 、四种脱氧核苷酸、 ___________ 、Mg2＋等成分加到一个特制的离心管中； (2)高温变性：把离心管置于____℃的环境中，使DNA碱基对之间的_____断裂，形成_____单链，这个过程称为高温变性； DNA单链 20～30个脱氧核苷酸 反应温度的控制 3. PCR的过程 DNA模板 一对引物 DNA聚合酶 95 氢键 两条 (3)低温复性：再将离心管置于___℃的环境中，使_______ ___分别结合到两条分开的模板链上，这个过程称为低温复性； (4)中温延伸：最后将离心管置于___ ℃的环境中，在____ _______的催化下，游离的脱氧核苷酸从引物的一端一个一个地连接上去，形成两条新的_____，这个过程称为中温延伸。 在1～2 h内重复_______次循环，DNA片段数可增至_____ ____倍。 4．PCR的结果 55 一对引 72 DNA 子链 25～30 106～ 物 聚合酶 107 为什么DNA复制必须有引物？ 提示　DNA聚合酶不能从头合成DNA，而只能以3′延伸DNA链，故DNA合成时，必须加入引物(其3′游离)以作为延长DNA子链的“引子”。 [思维激活1] (1)PCR原理 ①PCR原理：DNA分子在一定条件下可以进行半保留复制。 ②DNA的热变性原理：在80～100 ℃的温度范围内，DNA的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为变性；当温度缓慢下降后，两条被分离的DNA链又会重新结合成双链，这个过程称为复性。 1．PCR的原理 (2)PCR扩增方向 ①3′端和5′端：为了明确地表示DNA的方向，通常将DNA的羟基(—OH)末端称为3′端，而含磷酸基团的末端称为5′端；一个双链DNA分子中含两个3′端和两个5′端，如果一条链的方向是3′→5′，则另一条链的方向就是5′→3′，这就是反向平行的含义。 ②DNA分子中相邻两个脱氧核苷酸残基通过3′，5′磷酸二酯键相连，该化学键是由一分子脱氧核苷酸中3号碳原子上的羟基(—OH)，与相邻的另一分子脱氧核苷酸中5号碳原子上的磷酸基团脱水聚合而成。所以DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸。 (1)PCR的反应条件 ①稳定的缓冲液环境； ②DNA模板； ③分别与模板DNA两条模板链相结合的两种引物； ④四种游离的脱氧核苷酸； ⑤耐热的DNA聚合酶，一般用Taq DNA聚合酶； ⑥能严格控制温度变化的温控设备。 (2)PCR过程 ①高温变性 当温度上升到90 ℃以上时，双链DNA解聚为单链。 2．PCR的过程 ②低温复性 温度下降到55 ℃左右，两种引物通