升降散治疗内毒素发热实验探究.docVIP

升降散治疗内毒素发热实验探究 　【摘要】 　　目的研究升降散对内毒素发热的影响。方法采用大肠杆菌内毒素复制家兔毒素发热模型，设立正常对照组、模型组、白虎组、布络芬组，升降组，观察各组症状及体温变化，白细胞介素 -8 （IL-8），肿瘤坏死因子 -α（TNF-α）等指标变化。结果升降组症状表现较轻，降温效果平稳；升降组、白虎组、布络芬组家兔的血清 IL-8 和 TNF-α含量较模型组显著降低（P＜0.05 ～ 0.01）。结论 升降散对内毒素发热具有良好的治疗作用。 【关键词】 升降散 内毒素发热 实验研究 　　升降散一方，出自清代温病学家杨栗山的《伤寒瘟疫条辨》［1］：“瘟病总计十五方……，而升降散，其总方也，轻重皆可酌用”。现代药理研究认为［2］：僵蚕对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌等有一定抑制作用；蝉蜕有明显抗过敏作用；姜黄有抗炎、利胆、护肝、降血脂、抗血凝和抑制血小板聚集的作用；大黄药理作用广泛，对病原微生物有抗菌、抗真菌、抗病毒等作用，还有抗炎止血、降血脂血糖作用。表明该方有抗炎、抗病毒、调节免疫等作用，对炎症的治疗有一定的意义。近年来其抗炎机理已经成为温病界关注研究的焦点。笔者在临床上运用有较好的退热效果。因此，本研究通过大肠杆菌内毒素造模，设立对照组以观察该方对发热的影响及对 IL-8 和 TNF-α 水平的影响。 　　1 材料与仪器 　　1.1 动物 　　健康家兔共 40 只，体重 1.8～2.2 kg，基础肛温（ 39.0 ± 0.4）℃（ 38.7 ～ 39.6 ℃，因本实验时间正值酷暑，所以家兔肛温在正常范围内偏高），雌雄各半（雌兔未孕），由广西中医学院实验动物中心提供。 　　1.2 试剂及试剂盒 　　内毒素（由恒因生物有限公司提供），用无菌生理盐水配成 15 μg/ml 溶液，4 ℃冰箱冷藏，用前置 40 ℃温水温浴20 min［3］。IL-8 和 TNF -α 酶免试剂盒（由深圳晶美生物工程公司进口批号和）。 　　1.3 仪器 　　MK3 型号 IL-8 和 TNF-α 酶标仪（热电上海有限公司），CELLTAC 型号白细胞计数仪（日本 NIHON KOHDEN公司），Biofuqe.stratos 型高速液晶离心机（德国），DT 系列电子天平（美国双杰兄弟集团有限公司），715 型半导体数字肛温计（上海医用仪器厂），XE-2100 全自动血液分析仪（Sysmex 公司）。 　　1.4 药物制备 　　白虎汤：石膏 30 g ，粳米 15 g ，知母 15 g ，甘草 9 g ，水煎浓缩至每毫升含生药1 g。升降散：僵蚕 9 g ，蝉衣 6 g ，姜黄 6 g ，大黄 6 g，水煎浓缩至每毫升含生药1g。饮片均购自广西中医学院第一附属医院中药房。布络芬缓释胶囊（每粒300 mg，批号：060101），300 mg稀释于150 mg蒸馏水中制成浓度2 mg/ml的溶液，购自广西中医学院第一附属医院西药房。中药煎剂和布络芬稀释液分别经过高压灭菌后贮于置4℃冰箱内备用，用前置30℃温水温浴20 min。 　　　2 方法 　　2.1 动物分组与造模 　　健康家兔共40只，随机分为5组：正常对照组、模型组、布络芬组、白虎组、升降组，每组8只，每笼2只分开饲养。实验用兔实验前1周抽取血液，经检测比较后筛选出5组无差异性动物方可进行造模；并1次/d测直肠肛温，连续7 d，以平均值作为基础肛温［4］。抽血1周后，除正常对照组外，余组均在室温条件，动物自然清醒的状态下，由家兔的耳缘静脉注入大肠杆菌内毒素液每次1 ml/kg［3］（攻毒），正常对照组则注入等剂量无菌生理盐水1次，全部过程均无菌操作。 　　2.2 给药方法 　　实验动物与人临床用药换算按文献［5］进行换算。白虎组灌胃药物10 ml/kg；升降组灌胃5 ml/kg；布络芬组灌胃14 ml/kg；模型组、正常对照组灌胃生理盐水15 ml/kg，在攻毒前2 h和攻毒后立即，两次灌服完。 　　2.3 观察指标 　　①平均发热曲线；②白细胞及中性粒细胞含量观察；③血清 IL-8 和 TNF-α 含量观察。体温观察采用电子肛温计测量动物直肠温度，每 30 min 记录 1 次，白细胞及中性粒细胞含量的测定，于实验造模3 h 后由清醒家兔的耳缘静脉用2 ml 注射器连接5号针头采血1 ml ，置于普通试管中，用 XE-2100 全自动血液分析仪测量；血清 IL-8 和 TNF-α 的测量，也于实验造模3h 后由清醒家兔的耳缘静脉用 2 ml 注射器连接5号针头采血1 ml ，置于普通试管中，4℃，3 000 r/min，离心15 min，取上清液按 IL-8 和 TNF-α 酶免试剂盒说明严格操作。 　　3 结果 　　3.1 对