反相高效液相色谱法测定不同产地卷柏中阿曼托双黄酮含量.docVIP

反相高效液相色谱法测定不同产地卷柏中阿曼托双黄酮含量 　 作者：郑晓珂，赵献敏，王彦志，魏悦，郭永慧，冯卫生 【摘要】 　　目的建立测定不同产地卷柏中阿曼托双黄酮含量的高效液相色谱法。方法色谱柱为Agilent ZORBOX SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为乙腈-0.2%磷酸(40∶60)，柱温30 ℃；流速为0.8 ml·min-1；检测波长337 nm。结果阿曼托双黄酮含量为1.197%，平均回收率为99.30%，RSD=0.98%(n = 9)，线性范围0.1～0.6 μg·ml-1(r=0.999 8)。 结论该法快捷、灵敏、准确，可作为评价卷柏药材质量的参考依据。 【关键词】 卷柏 阿曼托双黄酮 高效液相色谱法 　　卷柏为卷柏科植物卷柏Selaginella tamariscina (Beauv.) Sping或垫状卷柏Selaginella pulvinata(Hook. et Grev.) Maxim) 的干燥全草，具有活血通经功效，主要用于经闭痛经、癥瘕痞块、跌扑损伤、崩漏、便血、脱肛等［1］病症。根据文献报道［2～4］，卷柏中主要含有阿曼托双黄酮、新柳杉双黄酮等化合物，具有抗脂质过氧化和清除自由基的作用［5］，对溶血性磷脂酰胆碱(LPC)诱导的血管内皮细胞损伤有保护作用［6］，其中阿曼托双黄酮的含量最大。采用反相高效液相法对卷柏药材指纹图谱研究的报道已见，但未见不同产地卷柏药材中阿曼托双黄酮含量测定的报道。本研究采用高效液相色谱法测定了全国10批不同产地卷柏中阿曼托双黄酮的含量。 　　1 仪器与试药 　　1.1 仪器 　　岛津UV-2201型紫外分光光度计；Shimadzu LC-10AT型高效液相色谱仪；SPD-10A型紫外检测器；AB204-N万分之一电子天平；AE240十万分之一电子天平；DZKW-4电子恒温水浴锅（北京中兴伟业仪器有限公司），旋转蒸发器SB-1000(上海爱朗仪器有限公司)。 　　1.2 试药 　　卷柏药材产地分别为安徽、北京、河南、新疆、山东、云南、湖北、河北、江西、甘肃，共收集10批样品，经过河南中医院药学院生药学科陈随清教授鉴定为卷柏科卷柏属卷柏Sela- ginella tamariscina (Beauv.) Sping的全草。阿曼托双黄酮为本实验室自制，纯度达到99%以上。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件及系统适应性实验 　　色谱柱为Agilent ZORBOX SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)。流动相为乙腈-0.2%磷酸（40∶60）。流速0.8 ml·min-1；检测波长337 nm；柱温30 ℃；进样量10 μl。 测定阿曼托双黄酮对照品溶液和卷柏药材供试品溶液，色谱图见图1。如图1所示，阿曼托双黄酮与相邻杂质峰的分离度大于2，理论塔板数按阿曼托双黄酮峰计算大于3 000。 　　2.2 对照品溶液的制备 　　精密称取干燥恒重的对照品2.50 mg，置50 ml容量瓶中，加95%乙醇超声溶解，定容至刻度，摇匀，用0.45 μm的微孔滤膜过滤，作为对照品溶液（50 μg·ml-1）。 　　2.3 供试品溶液的制备 　　精密称取卷柏药材（过3 号筛）粉末约4.00 g，置100 ml圆底烧瓶中，精密加入95％乙醇40 ml，85 ℃回流2 次，2 h/次，提取液回收溶剂，真空干燥。精密称取干燥恒重的乙醇提取物约3.00 mg，置100 ml容量瓶中加95%乙醇定容至刻度，摇匀，用0.45 μm的微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。 　　2.4 线性关系考察 　　精密吸取对照品溶液 0，2，4，6，8，10，12 μl依次进样，按上述色谱条件测定，记录色谱图，以峰面积(Y)对浓度(X)进行线性回归，得回归方程为：Y = 2 346 639 X +6 411.314（r=0.999 8）。结果表明阿曼托双黄酮在(0.1～0.6) μg·ml-1浓度范围内线性关系良好。 　　　2.5 精密度实验　 　　精密吸取50 μg·ml-1对照品溶液，重复进样6 次，10 μl/次，测定峰面积值，计算相对标准差，结果RSD=0.92%，显示精密度良好。 　　2.6 重复性实验 　　精密称取同一样品（产地：河南）适量，照“2.3”方法分别制备供试品溶液6份，照“2.1”法进行测定，结果平均含量为1.19% ，RSD=0.13%，表明本测定方法的重复性良好。 　　2.7 稳定性实验　 　　取同一样品(产地：河南) 适量，照“2.3”方法制备供试品溶液，室温下放置0，2，4，6，8，12，24，48 h进样10 μl，依法测定阿曼托双黄酮的峰面积值，计算相对标准偏差，RSD为0.35%。结果表