复方中草药提取物对鲤鱼非特异性免疫及生长性能影响.docVIP

复方中草药提取物对鲤鱼非特异性免疫及生长性能影响 复方中草药提取物对鲤鱼非特异性免疫及生长性能的影响 近20年来，人们逐渐发现抗生素和激素这些添加剂的应用对水产养殖业发展起一定的促进作用，但同时也带来了不可避免的负面效应。抗生素的大量使用和滥用破坏了动物体内微生态的平衡，导致耐药菌株的产生，使动物免疫力下降[1]。因此，世界上许多国家先后作出限用或禁用抗生素作饲料添加剂的决定，特别是欧盟已法定从 2000 年开始所有成员国全面禁止使用抗生素作饲料添加剂。2006 年，因滥用抗生素引起的“多宝鱼事件”给我国大菱鲆主要养殖区（山东、河北）造成了巨大的经济损失，严重影响了大菱鲆养殖业的健康快速发展。激素类的大量使用使动物体内的非特异性免疫能力下降[2]，所以天然的中草药添加剂引起了国内外的重视。 　中草药饲料添加剂是以自然界中动物、植物等为原料加工而成的饲料添加剂，具有高效、低毒、低残留等优点[3]。但是，传统的中草药添加剂往往是将中草药粉碎后直接添加到饲料中进行投喂的，存在药效慢、添加量大、适口性差、成本高等缺点。为了保证中草药添加剂的效果，本试验采用高浓度中草药和纯中草药提取物进行研究。 　1 材料与方法 　1.1 材料 　1.1.1 试验用鱼 　试验鱼为天津市换新水产良种场培育的健康鲤鱼，规格约150 g/尾。鲤鱼采购后，先用5%食盐水浸泡20 min消毒，然后放入暂养池内驯化2周。暂养期间，投喂饲料为基础饲料，以鲤鱼出现有规律摄食为驯化指标。 　1.1.2 试验药品 　试验药品成分为黄芪多糖、人参茎叶总皂苷、绿原酸、生物碱和黄酮，均购自河北征宇制药有限公司。 　1.2 方法 　1.2.1 试验设计与管理 　将各试验药品根据中草药药理及相互配伍原则配制，分别以0（对照）、0.1%（B1）、0.2%（B2）、0.3%（B3）的比例加入到基础饲料中，每组3个平行，每个平行放置25尾试验鱼，分别随机放入12个网箱内。每天08：00、12：00和16：00定时投喂，每天的投喂量约为体质量的3%，隔天09：00清池换水1/4，全天充氧，水温控制在 25 ℃ 左右。 　1.2.2 生长指标的测定 　喂养42 d后，每组捞取25尾鱼称重，计算各组鱼的相对增重率和成活率。每天检查草鱼的发病或死亡情况，做好记录，最后统计各组的成活率。饲料系数（CF）=饲料消耗量/增加的质量；相对增重率=（末尾平均体质量-初尾平均体质量）/初尾平均体质量times;100%；成活率=试验末鱼总数/试验初鱼总数times;100%。 　1.2.3 生化指标的测定 　1.2.3.1 血清的采集及制备 　分别在试验后14、28、42 d 时，从每个试验处理组随机取2尾鱼，用盛有肝素钠的一次性注射器采血2 mL，立即轻轻摇匀，使血液抗凝，置于 4 ℃ 冰箱内保存。 　1.2.3.2 超氧化物歧化酶（SOD）活性的测定 　采用南京建成生物工程研究中心生产的SOD试剂盒测定。原理：SOD活性采用黄嘌呤氧化酶法测定，通过黄嘌呤及其氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基，后者氧化羟胺形成亚硝酸盐，在显色剂的作用下呈紫红色，用可见光分光光度计测定其吸光度；当样品中含有SOD时，则因对超氧阴离子自由基专一性的抑制作用使形成的亚硝酸盐减少，比色时测定管的吸光度低于对照管。定义：1 mL反应液中SOD抑制率达到50%时所对应的SOD量为1个活性单位（U）。 　1.2.3.3 溶菌酶（LSZ）活性的测定 　采用南京建成生物工程研究中心生产的溶菌酶试剂盒测定。原理：在一定浓度的混浊菌液中，由于溶菌酶能水解细菌细胞壁上肽聚糖而使细菌裂解浓度降低，透光度增强，因此根据透光度变化来推测溶菌酶的活性。定义：在温度为37 ℃、波长为530 nm下，1 min内引起吸光度下降0.001为1个活性单位。 　1.2.3.4 过氧化氢酶（CAT）活性的测定 　采用南京建成生物工程研究中心生产的过氧化氢酶试剂盒测定。原理：CAT分解H2O2的反应可通过钼酸铵而迅速中止，剩余的H2O2与钼酸铵作用产生一种淡黄色的络合物，通过测定其生成量可计算出CAT的活性。定义：1 mL血清或血浆1 s分解1 mu;mol的H2O2的量为1个活力单位（U）。 　1.2.3.5 酸性磷酸酶（ACP）和碱性磷酸酶（AKP）活性的测定 　采用南京建成生物工程研究中心生产的酸性磷酸酶和碱性磷酸酶试剂盒测定。原理：酸性磷酸酶或者碱性磷酸酶在分解产生磷酸苯二钠的同时产生游离酚和磷酸，酚在碱性溶液中与4-氨基安替吡啉作用经铁氰化钾氧化生成红色醌衍生物，根据红色深浅可以测定ACP、AKP的活性。ACP活性单位的定义：100 mL血清在37 ℃与基质作用30 min时产生1 mg酚为1个金式单位。AKP活性单位的定义：100 mL血清在37 ℃与基