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多重耐药大肠埃希菌16S rRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因探究 　【摘要】 目的 了解多重耐药大肠埃希菌(ECO)氨基糖苷类药物耐药机制。方法 采用PCR检测20株多重耐药ECO菌11种16S rRNA甲基化酶和氨基糖苷类修饰酶基因。结果 1株检出16S rRNA甲基化酶基因(5.0%)，并为新亚型；16株检出氨基糖苷类修饰酶基因(80.0%)。15号株rmtB基因测得序列翻译成氨基酸序列与美国核酸库(GenBank)已登录的rmtB氨基酸不同，为新亚型。结论 本组多重耐药ECO菌氨基糖苷类耐药机制与产16S rRNA甲基化酶和产氨基糖苷类修饰酶相关。多重耐药ECO菌存在新的氨基糖苷类药物耐药机制。 【关键词】 大肠埃希菌； 16S rRNA甲基化酶； 氨基糖苷类修饰酶 ABSTRACT Objective To investigate mechanism of aminoglycoside resistance in multidrugresistant Escherichia coli. Methods The genes of 11 kinds 16S rRNA methylase and aminoglycosidemodifying enzymes were detected by polymerase chain reaction (PCR). Results In 20 strains, 1 strain carried 16SrRNA methylase gene (rmtB), 16 strains were positive for the genes of aminoglycosidemodifying enzymes. There were changes of aminoacids in the sequence of RmtB of No.15. A significant difference was found from the rest that landed in GenBank, which identified itself as new subtype. Conclusion The aminoglycoside resistance mechanism of the Escherichia coli was closely related with 16S rRNA methylase and aminoglycosidemodifying enzymes. The new mechanism of aminoglycoside resistance was discoved in multidrugresistant strains of Escherichia coli. KEY WORDS Escherichia coli; 16S rRNA methylase; Aminoglycosidemodifying enzymes 大肠埃希菌(ECO)是条件致病菌，对β内酰胺类和氨基糖苷类在内的常用抗菌药物呈多重耐药性。有关ECO菌耐药机制研究，国内报道β内酰胺类耐药机制较多，报道氨基糖苷类耐药机制较少，并仅限于6种氨基糖苷类修饰酶基因存在情况［1～4］。近年来，国外学者发现了氨基糖苷类耐药新机制——16S rRNA甲基化酶(编码基因为rmtA、rmtB、rmtC、rmtD和armA)［5～8］。为尽可能了解淮安市第一人民医院ECO菌临床分离多重耐药株氨基糖苷类药物各种耐药相关基因存在状况，我们检测了16S rRNA甲基化酶与氨基糖苷类修饰酶基因rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、armA、aac(3)I、aac(3)II、aac(6′)Ib、aac(6′)II、ant(3”)I和ant(2”)I，现报告如下。 1 材料与方法 1.1 菌株来源 20株ECO菌株均分离自2007年1～7月间淮安市第一人民医院住院患者标本。标本来源分别为尿液7株、痰液5株、血液5株、脓液3株；患者年龄2～75岁，男7例、女13例。全部菌株均使用VITEK32全自动微生物鉴定系统鉴定菌种。标准菌株为大肠埃希菌ATCC25922。 1.2 抗菌药物敏感性试验 用KB法测定18种抗菌药物的敏感性。根据美国CLSI 2006年版标准进行敏感性判断。头孢哌酮/舒巴坦参照头孢哌酮。20株多药耐药临床分离ECO菌对18种抗菌药物的敏感性见表1。 1.4 细菌处理 挑纯培养菌落置0.5ml离心管内(内预置200ng/ml蛋白酶K溶液200μl)，56℃水浴2h，改95℃水浴10min，加入Chelex100 40μl，离心(15000r/min)30s