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天花粉蛋白构效关系及进入细胞途径 　【摘要】 　　天花粉蛋白(Trichosanthin, TCS)因具有妊娠引产、抗肿瘤、抗病毒及免疫调节等多种药理学作用而倍受关注。研究天花粉蛋白的结构特征，明确其活性中心及过敏原性区域对于深入了解天花粉蛋白的生物学功能十分重要。该文对近年来关于天花粉蛋白构效关系的研究进展作了综述，并着重介绍了天花粉蛋白进入细胞的具体途径，为研究其他的核糖体失活蛋白提供新的思路。 【关键词】 天花粉蛋白　核糖体失活蛋白　 构效关系 　　Abstract：Trichosanthin (TCS), a ribosome inactivating protein extracted from the root tuber of Chinese medicinal herb Trichosanthes kirilowii Maximowicz, has multiple pharmacological properties including abortifacient, anti-tumor, anti-HIV and immune regulation. The antigenicity and short plasma half-life limited its wide clinical administration. In this review, studies about locating antigenic sites and prolonging plasma half-life were discussed. Studies on structure–function relationship and mechanism of cell entry were also covered. Recently, TCS has been found to induce apoptosis, enhance the action of chemokines and inhibit HIV-1 intergrase. These findings give new insights on the pharmacological properties of TCS and other members of ribosome-inactivating proteins. 　　Key words：Trichosanthin； Ribosome-inactivating protein； Structure-function relationship 天花粉蛋白（Trichosanthin, TCS）是从葫芦科植物栝蒌的块根中提取出来的分子量为27 KD的单链核糖体失活蛋白(Ribosome Inactivating Proteins, RIPs)，其基因序列及三级结构均已被阐明［1］。TCS在临床上被用于治疗宫外孕、绒毛膜上皮癌，恶性葡萄胎等。体外研究表明, TCS能抑制HIV病毒、单纯疱疹病毒、麻疹病毒等多种病毒的复制［2，3］，对宫颈癌、白血病等肿瘤也有不同程度的抑制作用［4，5］，表明TCS具有多种药理学活性。但TCS是一种植物蛋白，可引起一系列过敏或类过敏反应，明确TCS的活性中心及过敏原性区域十分重要。本文就TCS结构与功能的关系以及TCS如何进入细胞的相关研究进展作一综述。 　　1 天花粉蛋白的基因序列和分子结构 Collins等［6］于1990年报道了TCS的一级结构，序列分析表明该基因是一个连续表达的核苷酸序列，中间没有内含子及其它任何插入序列，它编码289个氨基酸，其中N端23个氨基酸的信号肽和C端 19个氨基酸在天然的 TCS中是不存在的。天然TCS的成熟肽有247个氨基酸，在起始密码子上游有数个TATA盒。潘克祯等［7］通过重建TCS分子模型并在2. 6A°分辨率进行晶体学修正，发现TCS分子的二级结构由8段α螺旋和13条β链组成。α螺旋长短不一，其中α4 、α5及α6为三段连续的a螺旋，且α5与活性中心有关。13条β链共组成4个β折叠层，最大的β折叠层由6条β链组成。从整个分子来看，α螺旋相对集中在蛋白质分子内部，而β链构成的β折叠层则分布在分子表面，这是TCS分子三维结构的显著特点。 　　2 天花粉蛋白的构效关系 　　2.1 活性位点分析基于天花粉蛋白已知的三级结构和限制性蛋白酶解分析发现，研究发现TCS潜在的活性位点位于110～174氨基酸区域，删除TCS的前100位氨基酸对其RNA-N-糖苷酶活性的影响并不大［8］，而120到123位氨基酸对天花粉蛋白的生物学活性至关重要，删除或疏水化取代这一位置的氨基酸会导致其核糖体失活活性降低4 000倍［9］。除此之外，160和189位