安宫牛黄丸对脓毒症大鼠血浆内毒素水平影响.docVIP

安宫牛黄丸对脓毒症大鼠血浆内毒素水平影响 　 作者：李俊，张丹，吴清和，黄萍 【摘要】 目的探讨安宫牛黄丸对盲肠结扎穿孔（CLP）法所致脓毒症大鼠血浆内毒素水平的影响。方法取雄性SD大鼠90只，随机分为5组，分别为空白对照组、模型对照组、安宫牛黄丸低剂量组、中剂量组、高剂量组。各组动物于手术前禁食12 h，采用盲肠结扎穿孔法（CLP）复制脓毒症模型，中药组每只大鼠分别于术前0.5 h和术后6 h按1.0，2.0，3.0 g/kg的剂量灌胃安宫牛黄丸，空白对照组和模型组动物灌胃饮用水。于术后24 h，动物腹腔采血以终点显色鲎试验法测定血浆内毒素水平，另外取动物肺脏匀浆测定肺组织髓过氧化物酶（MPO）含量。结果模型组血浆内毒素水平明显高于空白对照组，而安宫牛黄丸低、中剂量组内毒素水平均显著低于模型组（P＜0.01）。模型组肺组织MPO含量明显高于空白对照组，而安宫牛黄丸低、中剂量组肺组织MPO含量均显著低于模型组（P＜0.05和P＜0.01）。结论安宫牛黄丸具有降低脓毒症大鼠血浆内毒素水平和肺脏MPO含量的作用，提示安宫牛黄丸对脓毒症具有一定的干预作用，为进一步探讨安宫牛黄丸治疗脓毒症的作用机理提供了药效学基础。 【关键词】 安宫牛黄丸； 脓毒症；盲肠结札穿孔； 内毒素； 髓过氧化酶； 鲎试验 脓毒症（Sepsis）是严重创（烧）伤、休克、外科大手术后常见的并发症，是由各种致病性微生物（包括细菌、病毒、真菌等）侵入人体而引起的具有损伤性（引起多器官损伤）的激烈全身炎症反应，其本质上是一个失控的全身自我破坏性炎症反应过程［1］。脓毒症（旧称败血症）属于中医温热病范畴，是由于火毒炽盛、正气亏虚，正不胜邪、邪毒内陷，客入营血所致，热毒伏于血脉，弥漫三焦，内及脏腑，直犯神明，而成本病。安宫牛黄丸出自我国清代著名温病学家吴鞠通著作《温病条辨》，方由牛黄、犀角、黄连、黄芩、栀子、郁金、麝香、珍珠、朱砂、雄黄、冰片等11味中药组成，具有清热解毒、芳香辟秽、开窍通闭之功效，对温病有独特的疗效，是中医治疗温热病的温病“三宝”之一，也是中医危重病症急救要药。本实验根据安宫牛黄丸的主治功效，通过观察安宫牛黄丸对脓毒症大鼠血浆内毒素水平和肺组织髓过氧化酶（MPO）含量的影响，以揭示安宫牛黄丸对脓毒症的干预作用，为进一步探讨安宫牛黄丸治疗脓毒症的作用机理提供一定基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物模型的制备健康雄性SD大鼠，体质量180～220 g。在Wichterman［2］报道方法的基础上进行改良，复制腹腔感染型脓毒血症。术前禁食12 h，用10﹪水合氯醛按15 ml/kg的剂量，腹腔注射麻醉大鼠，常规消毒腹部，在下腹部正中央切口，长约2 cm，打开腹腔寻找盲肠，小心分离其远端与大肠的系膜，盲肠内如有粪便，则把粪便小心挤向相连的大肠，寻找盲肠与小肠及大肠交界处，用灭菌4号丝线环形结扎，结扎完毕后应仔细检查，保持肠道通路正常。在与肠系膜相对的盲端肠壁浆膜面用9号针头穿刺两次，两个针孔相距约3 mm，第1针孔距盲端约3 mm，同时在第2针孔处放置一条宽2 mm的橡胶引流片，防止伤口愈合，轻轻将肠子放回原处，关闭腹腔，逐层缝合。术后即刻皮下注射生理盐水，补充手术过程中体液的丢失，剂量1 ml/100 g体质量。 　　1.2 动物分组与给药健康雄性SD大鼠90只，体质量180～220 g，购至广东省医学实验动物中心。将动物随机分为5组，分别为空白对照组（n=10）、模型对照组（n=20）、安宫牛黄丸低剂量组（n=20）、安宫牛黄丸中剂量组（n=20）和安宫牛黄丸高剂量组（n=20）。给药组每只大鼠分别于术前0.5 h和术后6 h按1.0，2.0，3.0 g/kg的剂量灌胃安宫牛黄丸，空白对照组和模型组动物灌胃等量饮用水。 　　1.3 标本的采集和处理无菌状态下腹主动脉采血，用肝素钠抗凝，3 000 r/min离心15 min，取血浆于-20℃保存。无菌状态下，取肺组织200 mg，加入1.8 ml生理盐水在冰浴下匀浆，3 000 r/min离心15 min，取上清液。 　　1.4 指标检测方法血浆内毒素检测采用鲎试剂合成基质偶氮显色法（试剂盒购于厦门市鲎试剂实验厂有限公司）；肺组织MPO活力检测采用酶学分光光度法测定（试剂盒购于南京建成生物工程研究所）。 　　1.5 统计学处理 应用SPSS11.5统计软件包进行统计分析，数据以±s表示，采用t检验和方差分析。 　　2 结果 　　2.1 安宫牛黄丸对大鼠血浆内毒素含量的影响与空白对照组比较，脓毒血症模型组动物血浆内毒素含量显著高于空白组（P＜0.01）。而安宫牛黄丸低剂量组和中剂量组血浆内毒素含量显著低于模型组（P＜0.01），安宫牛黄丸高剂量组虽然也有降低血浆内毒素含量的趋势，但与模型对照组比较没