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川芎嗪对小鼠化学性肝损伤实验探究 　【摘要】 　　目的研究川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对小鼠化学性肝损伤的作用及其可能机制。方法采用在体和离体两种方法观察: 在体以D-氨基半乳糖（D-galactosamine,D-Gal） 诱导小鼠急性肝损伤模型,测定各组肝损伤小鼠血清谷丙转氨酶(glutamic pyruvic transaminase,GPT) 、谷草转氨酶(glutamic-oxalacetic transaminase;GOT) 活性,及肝组织丙二醛(malondialdehyde,MDA) 、黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase ,XOD) 、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathion peroxidase , GSH-PX) 、一氧化氮(nitrogen monoxidum ,NO) 、一氧化氮合成酶(nitric oxide synthetase ,NOS) 、诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase ,iNOS) 含量。体外实验采用小鼠离体肝细胞原代培养,并建立CCl4 诱导肝细胞坏死性损伤模型,检测TMP 对其的影响。结果TMP能显著降低小鼠血清中升高的GPT，GOT，降低XOD 活力和过氧化物终产物MDA 的含量。对氧化应激引起的肝脏GSH 含量下降具有升高作用。TMP 可以显著降低离体培养中染毒肝细胞中的GPT水平。结论 提示TMP对小鼠化学性肝损伤具有显著的保护作用。 【关键词】 川芎嗪 肝损伤 肝原代培养细胞 　　川芎嗪为中药川芎的有效成分，化学结构为四甲基比嗪（Tetramethylpyrazine ，TMP）, 被广泛应用于心脑血管闭塞性疾病的治疗［1］。川芎嗪有解痉、降压、扩张血管等广泛的生物作用。川芎嗪在肝细胞方面的研究尚少见报道。有研究表明［2］，川芎嗪能减轻大鼠肠缺血再灌注所致肝脏损伤。其机制与减少大鼠脂质过氧化,改善ATPase功能有关。本实验采用了体内给药以及建立体外模型两种方法观察TMP对小鼠急性肝损伤的保护作用。在体实验主要从体内降酶和抗脂质过氧化、抑制NO等方面研究TMP对肝损伤的治疗作用。离体采用体外小鼠原代细胞模型,排除神经和体液因素的影响,观察TMP对CCl4 染毒的小鼠肝细胞的保护作用,进一步探讨TMP 及阳性对照药物的膜保护作用机制，以便为临床用药提供参考。 　　1 材料与方法 　　1. 1 动物　 　　昆明种小鼠,雌雄兼用,体重21～24 g（荆门职业技术学院实验动物中心提供）。 　　1. 2 药品与试剂　 　　川芎嗪注射液40 mg/2ml，（北京第四制药有限公司生产，批号：200503020），D-半乳糖胺( D-Gal)，重庆医科大学提供，批号：051215 ，四氯化碳(CCl4 )，分析纯,南京化学试剂一厂生产，批准文号：GB32226；生化检测试剂盒均购自南京建成生物工程研究所提供；刀豆蛋白A (Concanavalin A , Con A ,Sigma)；噻唑蓝(MTT , Sigma)； 胶原酶(Collagenase ,475 U·mg-1) 为Sigma 产品；二甲基亚砜(DMSO , 苏州正兴化工厂) ；乙二醇- 双(α-氨基乙基)-醚-四乙酸(HEPES) 均购自和光纯药药工业株式会社。 　　1.3 动物分组 　　昆明小鼠随机分为5组,每组10只。分别为①正常对照组:生理盐水20 ml·kg- 1；②模型组:生理盐水20 ml·kg- 1； ③TMP高剂量组:800 ml·kg- 1；④中剂量组400 ml·kg- 1；⑤低剂量组200 ml·kg- 1，灌胃1次/d,连续给药7 d。于末次给药1 h后,除正常对照组外, 其他各组小鼠均腹腔注射10% D-Gla (800 mg·kg-1 ) 。禁食不禁水,16 h 后由球后静脉丛取血,分离血清备测GPT，GOT。处死小鼠后,取肝称重并计算肝系数(肝脏湿重与体重之比) 。 　　1.4 血清酶活性测定　 　　分离血清后用赖式改良法测GPT，GOT;称取肝脏总重量,测肝重系数变化。 　　1.5 肝组织匀浆酶活性测定　 　　用考马斯亮蓝法(试剂盒) 测定蛋白质含量,用硫代巴比妥酸法(试剂盒)测定丙二醛(MDA) 含量,用紫外分光光度法(试剂盒) 测定黄嘌呤氧化酶(XOD) 活性,用二硫双硝基苯甲酸显色法(试剂盒) 测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX) 活性,用硝酸还原酶法(试剂盒)测定一氧化氮(NO) 。 　　1.6 肝细胞分离　　 　　小鼠腹腔注射戊巴比妥麻醉,用70%的酒精棉球消毒小鼠体表后,背位固定。再次用酒精棉球消毒其腹部,腹正中V形切口,使腹腔充分暴露,门静脉插管并固定,向肝脏灌注37 ℃预温的前灌流液( 无钙