巢式MSP法检测恶性血液病细胞株p16基因启动子甲基化状态探究.docVIP

巢式MSP法检测恶性血液病细胞株p16基因启动子甲基化状态探究 　 作者：周华蓉，沈建箴，付海英，叶宝国，范丽萍，林福安 【摘要】 本研究应用改进的甲基化特异性PCR（MSP）法，即巢式甲基化特异性PCR法检测6种肿瘤细胞株p16基因启动子的甲基化状态效率，探讨其在筛选p16基因启动子高甲基化的肿瘤细胞株，及将其作为研究基因甲基化与表达关系的理想细胞模型中的应用。6种肿瘤细胞株基因组DNA经碱变性后以亚硫酸盐修饰，再用巢式甲基化特异性聚合酶链反应扩增，分析检测其p16启动子区CpG岛的甲基化状态。结果表明： CA46、U266都有不同程度的p16基因启动子区甲基化，而Molt4、 K562、HL-60、Jurkat的p16基因启动子区均未甲基化。结论： 用巢式甲基化特异性PCR可以准确的检测出恶性血液病细胞株p16基因的甲基化状态，方法简单，灵敏且重复性强，可以广泛用于筛选各种p16基因启动子区甲基化的恶性血液病细胞株以及恶性血液病诊断。 【关键词】 巢式甲基化特异性聚合酶链反应 　　Detection of Promoter Methylation of p16 Gene in Hematological Malignant Cell Lines by Nested Methylation Specific Polymerase Chain Reaction 　　Abstrac