实验：阿司匹林血药浓度测定.pptVIP

阿司匹林血药浓度测定 一、实验目的 1.掌握阿司匹林血样的处理方法 2.掌握血药浓度-时间曲线的测定方法 3.掌握单室模型血管外给药药物动力学参数的提取方法 二、实验原理 阿司匹林在体内转化为水杨酸盐。把混合试剂加到家兔口服阿司匹林后采集不同时间的血清样本中，升汞沉淀蛋白质，而铁盐与水杨酸作用显紫色，在一定温度范围内，显色强度与水杨酸的浓度成正比。在λ540nm波长处测定紫色溶液的吸光度（A），再根据标准曲线进行浓度换算，即得到给药后不同时间的血药浓度值。采用残数法求出Cmax，tmax，K，t1/2，V等有关药动学参数。 三、试 剂 1.混合试剂。（升汞+硝酸铁） 2.水杨酸标准溶液（500μg/ml） 四、实验内容 1.血清水杨酸标准曲线的制作 取刻度离心管5只，各加入空白血清0.5ml，依次加入水盐酸标准液0.1、0.3、0.5、0.7、0.9ml，各加蒸馏水至2.0ml，加入混合试剂4.0ml，振摇混合，离心10min，分离上清液。测定吸收度，并以2ml蒸馏水加4ml混合试剂作空白对照。在λ540nm处测定上清液的吸收度（A） 2.血药浓度测定 （1）实验家兔的准备及给药方法 体重2.5～3kg，耳完整无缺，静脉清晰，血流通畅无阻滞的健康家兔 ，提前12h禁食 口服片剂剂量为50～100mg/kg 给药时，二人协作，一人坐好，将兔躯干体夹于两腿之间，左手握住双耳，固定头部，右手抓住前肢，另一人将开口器横放于兔口中，将舌压在开口器下面，固定开口器，用镊子夹住药片，从开口器洞孔送入咽部，用20ml水冲服下。 （2）实验家兔取血时间和方法 取血时间：给药后，在0.25 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 4 5 7 9h分别取兔耳静脉血2ml 取血方法 ：家兔耳静脉切口法 固定家兔，在兔耳静脉处剪毛，用酒精棉球擦洗，并用手弹打耳根部，使局部充血，用手术刀片在耳缘静脉远心端进行横切，滴血取血样1.5～2ml。取血毕，用干棉球压住出血口数分钟即可止血，下次取血时，可在原刀口出进行。，出血太慢时，可用二甲苯涂擦兔耳，使其充血。 （3）分离血清及测定 将血样置于室温下，10～30min凝血，若室温在10℃以下，可将血样置于37℃水浴中或孵箱内保持2h左右，加速血清渗出，待血清渗出后，离心（2500转/min），分离上清液（血清）。 吸取血清0.5ml置试管中，按实验内容1……从各加蒸馏水至2.0ml起操作，在λ540nm处测定上清液的吸收度A，并在标准曲线方程计算出水杨酸的浓度。 五、实验数据处理 1.作图：在座标纸上以血药浓度-时间描点作图。 2.用线性回归法法求出口服给药后的各药物动力学参数（Cmax，tmax，K，Ka， t1/2，V，CL），同时计算AUC0～∞（积分法或梯形法）。 * * 0.787 0.643 0.443 0.282 0.135 A 895.5 696.5 497.5 298.5 99.5 C （μg/ml） 5 4 3 2 1 试管号 *