应用蛋白质组学探究原发性肝癌中医证型探析.doc

应用蛋白质组学探究原发性肝癌中医证型探析 　【摘要】 　　通过分析原发性肝癌的蛋白质组学研究现状及肝癌中医辨证分型研究，探讨应用蛋白质组学技术研究肝癌中医证型的可行性及方法，给传统证候研究带来新的契机。 【关键词】 原发性肝癌 蛋白质组学 证候 　　随着现代医学的发展，人类基因组计划的完成，标志着人类基因研究进入了一个新的阶段，但基因组DNA序列并不能完全反映这些信息，不足以描述整个生命活动，深入研究基因功能的执行者——蛋白质显得十分必要，蛋白质组学是应用大规模蛋白质分离和识别技术研究蛋白质组的一门学科。原发性肝癌的发生是一个多环节、多因素的复杂过程，在分子水平有不同的功能性蛋白的参与，若能为肝癌的辨证分型提供现代医学生物学依据，将对“证”的半定量化、定量化及客观化、标准化，建立西医微观指标与中医证候的联系，探索“证”的实质。本文就运用蛋白质组学研究原发性肝癌中医证型作一初步探讨。 　　1 原发性肝癌的蛋白质组学研究 　　目前原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，我国年发病人数约35万，每年约32万人死于此病，新患肿瘤病人中55％发生在中国［1,2］，严重威胁着人们的健康及生命，现已成为我国第二位恶性肿瘤致死原因［3］。目前大多数肝癌诊断时已经是晚期，预后差，中位生存期仅为6个月，3年生存率仅为5.1%，5年生存期为0［4］。 　　“蛋白质组”这一概念是由澳大利亚的Wilkins和Willians于1994年提出，目前定义为一个基因组所表达的全部蛋白质［5］。蛋白质组学以蛋白质组为研究对象，是专门研究细胞内全部蛋白的动态表达, 是对基因组所表达的整套蛋白质的分析，是真正的对基因的功能(或称结果)进行研究的一门科学，与基因组的均一性相比,蛋白质组则具有多样性。从功能水平看，肿瘤是一种蛋白质组疾病。深入研究肝癌患者的蛋白质谱的变化，对揭示和发现肝癌发生、发展的规律有重要意义。 　　目前有学者运用蛋白质组学技术从细胞、组织、血清等方面对肝癌进行了深入研究。Yokoo H［6］等发现9株分泌甲胎蛋白的HCC细胞株与不分泌AFP的7株HCC细胞株相比，有6种蛋白表达上调，5种蛋白表达下调，质谱分析显示这11种蛋白与细胞凋亡、糖代谢、细胞骨架构成及蛋白质翻译有关，而凋亡、糖代谢等的异常均与HCC发生有关。 　　Li等［7］用双向电泳的方法和质谱技术分析鉴定肝癌组织和癌旁组织之间的差异蛋白，发现80个点，其中包括Stathmin 1，PCNA， Heat shock 27 kD等与肿瘤细胞增殖相关的蛋白。Song等［8］应用蛋白组学研究方法双向电泳和质谱技术分析鉴定有转移和无转移HCC原发灶组织间的差异表达蛋白，初步鉴定出16个蛋白，包括热休克蛋白27、角化蛋白28、S100钙结合蛋白A10等。 　　Lee等［9］检测肝细胞癌、慢性肝病和健康人的血清，发现分子质量8920的蛋白质峰与HCV感染密切相关，在HCV阳性的慢性肝病患者及肝细胞癌患者中表达均明显上调，与HBV感染组、健康人中的表达存在显著差异，经鉴定这个8920的蛋白质为补体C3a，该补体有可能作为一种独立的生物标志物，在诊断HCV感染的慢性肝病和肝细胞癌患者的过程中发挥作用。黄成等［10,11］在研究中发现，门静脉癌栓、肿瘤大小、肿瘤数目是影响肝细胞癌患者血清蛋白质指纹图谱的重要因素，而性别、肝硬化、AFP等对血清蛋白质指纹图谱没有明显影响；肿瘤大小以5cm分界对血清蛋白质指纹图谱影响最大；门静脉肉眼癌栓对血清蛋白质指纹图谱影响明显大于镜下癌栓，其中筛选出的16个蛋白分子标记物可能与肝细胞癌门静脉癌栓形成有关。 　　一个基因并不只表达一种蛋白质，遗传的差异性使得蛋白质的表达差异很大，出现个体差异，因为蛋白质组反应了细胞内在的遗传程序和直接的环境影响。即在同一生物个体的在肿瘤研究方而，蛋白质组学技术可揭示肿瘤蛋白表达水平的变化与肿瘤发生发展不同阶段的关系，有助于肿瘤的诊断和治疗，将成为寻找疾病分子标记和药物靶点的方法之一。蛋白质组学对于机体、组织或细胞全部蛋白质表达和功能进行研究的思路与中医证候认识疾病的整体观、辨证观有着趋同性。通过对差异个体间的蛋白质组比较分析，可以找到某些“疾病特异性的蛋白质分子”，蛋白质组学方法在证候研究中的合理应用,应该会给传统证候研究带来新的契机。 　　2 肝癌中医辨证分型研究现状 　　由于中晚期肝癌的治疗效果不理想，中医药参与原发性肝癌的多学科综合治疗模式逐渐成为临床疗效提高的关键及肝癌临床研究的热点之一。尽管近年中医药对肝癌的研究取得了较大的进展，具有缓解临床症状，改善生存质量，延长生存期及配合放化疗减毒增效的作用。但仍存在着辨证分型不规范、辨证分型难以体现肝癌自身独有的特点、缺乏流行病学研究等缺点。鉴于目前肝癌患者仍缺乏有效的治疗方