微生物来源次黄嘌呤一磷酸盐脱氢酶抑制剂2264 A及B探究.doc

微生物来源次黄嘌呤一磷酸盐脱氢酶抑制剂2264 A及B探究 　作者：林洁 可爱兵 张雪莲 郑智慧 朱京童 路新华* 李业英 崔晓兰 石英 张华 贺建功 【摘要】 利用自建的快速高效的次黄嘌呤一磷酸盐脱氢酶(Inosine monophosphate dehydrogenase，IMPDH)抑制剂的高通量筛选模型，筛选分离得到两个活性化合物2264 A和B，通过对其紫外、质谱、核磁等理化数据的分析确定2264 A为cyclopenol，2264 B为viridicatol。2264 A和B对IMPDH的IC50分别为69.68、11.86μmol/L；体外脾淋巴细胞增殖实验显示2264 A和B分别在322.6和65.8μmol/L浓度下可完全抑制由ConA活化的脾淋巴细胞增殖，表明2264 B在分子水平和细胞水平均表现出较好的免疫抑制活性，2264 A的活性相对较弱。 【关键词】 次黄嘌呤一磷酸盐脱氢酶； 免疫抑制剂； Cyclopenol； Viridicatol ABSTRACT Inosine monophosphate dehydrogenase (IMPDH) is an essential ratelimiting enzyme in the purine metabolic pathway, catalyzing the de novo synthesis of purine nucleotides required for lymphocyte proliferation. IMPDH has therefore been an attractive target for developing immunosuppressive drugs. This investigation was to discover new IMPDH inhibitors from metabolites of microorganism, and two active compounds 2264 A and B were isolated. 2264 A and B were identified to be cyclopenol and viridicatol by their physicochemical properties, MS, 13CNMR and 1HNMR analysis. IC50 of 2264 A and B were 69.68 μmol/L and 11.86 μmol/L to IMPDH, respectively, and they could completely inhibit the spleen lymphocytes proliferation stimulated by ConA at 322.6 μmol/L and 65.8 μmol/L in vitro. 2264 A and B showed moderate inhibitory activity to IMPDH and spleen lymphocytes proliferation. KEY WORDS Inosine monophosphate dehydrogenase; Immunosuppressant; Cyclopenol; Viridicatol 免疫抑制剂在临床上应用广泛，不仅能够有力地推进临床器官移植的实施，延长移植物的存活率，改善器官移植患者的生存质量，同时也为许多自身免疫性疾病如红斑狼疮、类风湿病等的治疗开辟了广阔的应用前景。但是现有的免疫抑制剂在临床应用中仍然存在不同程度的毒副作用、治疗对象和方案较局限等缺点，普遍存在一些严重不良反应，如肝毒、肾毒、神经毒性、消化道反应、内分泌系统失调、皮肤损坏和致癌作用等。因此开发全新的低毒、高效免疫抑制剂很有必要［1，2］。 次黄嘌呤一磷酸盐脱氢酶(inosine monophosphate dehydrogenase，IMPDH)是鸟嘌呤核苷酸经典合成途径的限速酶，IMPDH受抑制将导致鸟嘌呤核苷酸缺乏，DNA合成受阻，使细胞静止于G1期，因此其活性与细胞增殖紧密联系。这种酶的抑制剂被发现具有抑制免疫力的作用［3，4］，因此IMPDH成为免疫相关疾病药物的重要靶点。 为了研究和发现更加有效和低毒的免疫抑制药物先导化合物，本研究利用以IMPDH为靶点的高通量筛选模型从微生物的代谢产物中进行药物筛选，并从阳性菌株2264的发酵产物中分离得到活性化合物2264 A和B。本文报道了2264 A和B的筛选、发酵、分离纯化、结构鉴定及其生物学免疫活性。 1 材料与方法 1.1 筛选用微生物的菌株 真菌菌株2264由本室从5000株真菌中筛