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微生物转化虎杖苷粗提物生成白藜芦醇探究 　作者：袁润蕾，徐萌萌，孙艳娟，李猷，孙启玲，万端极 【摘要】 　　目的 利用一株根霉菌对虎杖苷粗提物进行液态发酵，使虎杖苷转化成白藜芦醇。方法采用单因素实验确定氮源种类及添加量，通过正交实验法优化发酵条件。结果在10%虎杖苷粗提物中添加1.5%的尿素作为氮源，采用薄层色谱法（TLC）确定在优化发酵条件下转化时间为26.8 h，通过高效液相色谱法HPLC证明虎杖苷转化为白藜芦醇，转化率95.8%。结论虎杖苷粗提物可以通过微生物发酵得到白藜芦醇。 【关键词】 虎杖苷；白藜芦醇；根霉菌；微生物转化 　　Abstract:ObjectivePolydatin in Polydatin extraction was transformed to resveratrol in liquid state fermentation by R. nigricans. MethodsThe kind and the append mate of nitrogen source were confirmed by the single factor experiment. The conditions of fermentation were optimized by orthogonal experiment. ResultsCarbamide was the optimum nitrogen source and the append mate was 1.5%. Under the optimized condition the transformation time was 26.8h. It was prooved that Polydatin could be transformed to Resvertrol by high performance liquid chromatography and the transformation rate could reach 95.8%. ConclusionPolydatin in Polydatin extraction can be transformed to resveratrol by microbial transformation. 　　Key words:Polydatin；Resveratrol；R. nigricans; Microbial trasformation 虎杖为蓼科植物Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.的干燥根茎，别名苦杖根、活血龙、大虫杖等［1］。其中重要的活性成分为二苯乙烯类的白藜芦醇（Resveratrol）和白藜芦醇苷(Polydatin)，也叫虎杖苷。白藜芦醇是一种活性多酚类物质［2］，具有明显的降低血脂，预防心脑血管疾病以及抗癌等重要作用，是目前世界上一种最新的药用保健活性物质，有望发展成为抗癌新药［3］。目前，该产品国际市场需求量大，具有良好的市场前景。天然白藜芦醇主要以葡萄糖苷（虎杖苷）的形式存在于虎杖中，虎杖中的白藜芦醇含量在0.1%～0.2%左右，虎杖苷的含量在2%左右，虎杖苷的含量明显高于白藜芦醇。理论上，采取化学法能将虎杖苷转化为白藜芦醇，但其工序繁杂并生成大量的异构体，造成分离纯化困难，生产成本非常高，不被认可。目前，生物法是直接利用虎杖进行带渣发酵，通过根霉菌分泌的酶切断白藜芦醇苷的糖苷键，转化得到白藜芦醇（图1）， 该法存在发酵体积庞大、成本高、发酵浓度无法提高等问题［4］。因此本课题利用虎杖苷粗提物进行发酵，可以提高发酵体系中虎杖苷的含量、缩小发酵体积、提高发酵效率，更易于白藜芦醇这种医药中间体的工业化，为生产白藜芦醇提供了一种便捷、有效的方法。 　　1 器材与方法 　　1.1 仪器与药品DOINEX高效液相色谱仪；AN0298分析天平（上海民桥精密科学仪器有限公司）；虎杖（湖北省药材公司）；虎杖苷标准品、白藜芦醇标准品（成都思科华有限责任公司）；其它试剂均为分析纯；无机盐浓缩液：KH2PO4 0.1%, MgSO4 0.05%,(NH4)2SO4 0.1%；虎杖苷粗提物（粉末状，虎杖苷含量14.78%）。 　　1.2 菌种编号T-34，由四川大学生物资源与生态环境教育部重点实验室提供，从自然界分离筛选得到，经鉴定为一株根霉菌。 　　1.3 方法 　　1.3.1 虎杖苷和白藜芦醇的TLC检测方法 虎杖苷和白藜芦醇的TLC法薄层色谱［5］条件，展开剂：醋酸乙酯-丙酮 -醋酸体积比为6∶2∶0.5；显色剂：3 %磷钼酸无水乙醇溶液, 110 ℃显色3 min［5］。 　　1.3.2 虎杖苷和白藜芦醇的高效液相色谱法HPLC检测方法色谱柱C18柱（4