第14章 核酸的理化性质.ppt

DNA为白色纤维状固体，RNA为白色粉末状固体。 都微溶于水，其钠盐在水中的溶解度较大。但不溶于乙醇、乙醚和氯仿等一般有机溶剂。 DNA和RNA在细胞中常以核酸—蛋白复合体（核蛋白）形式存在，两种核蛋白在盐溶液中的溶解度不同。 DNA核蛋白 RNA核蛋白 0.14mol/LNaCl - + 1-2mol/LNaCl + - DNA溶液的粘度很大，而RNA溶液的粘度小得多。核酸发生变性或降解后其粘度降低。 核酸受到强大离心力的作用时，可从溶液中沉降下来，其沉降速度与核酸的大小和密度有关。 与蛋白质相似，RNA分子中既含有酸性基团（磷酸基）也含有弱碱性碱基基团，因而RNA也具有两性性质。 由于RNA分子中的磷酸是一个中等强度的酸，而碱基呈现弱碱性，所以RNA的等电点比较低。（当核酸分子内的酸性解离和碱性解离相等，本身所带的正电荷与负电荷相等时，此时核酸溶液的pH值即为核酸的等电点pI）RNA在其等电点时溶解度最小。 RNA的等电点比较低的原因，是RNA分子中核糖基2′-OH通过氢键促进了磷酸基上质子的解离。 一、核酸的理化性质——核酸的水解 1、酸水解 核苷酸的糖苷键和磷酸二酯键均可被酸水解，但糖苷键比磷酸二酯键更易被酸水解。 核酸的理化性质——核酸的水解 2、碱水解 RNA的磷酸键易被碱水解，产生核苷酸，DNA的磷酸键则不易水解，因为RNA上2‘-OH基，在碱作用下易形成磷酸三酯而易水解。 二、核酸的理化性质——核酸的紫外吸收 1、紫外吸收 DNA和RNA的碱基有共轭双键，而使核酸在240~290nm有光吸收，最大吸收在260nm附近。 可用紫外分光光度法进行核酸纯度鉴定。 纯DNA样品：A260/A2801.8 纯RNA样品：A260/A2802.0 对纯样品：A=1.0相当于50ug/mL双链DNA或40ug/mL单链DNA或20ug/mL寡核苷酸。 核酸的理化性质——核酸的紫外吸收 2、增色效应与减色效应 核酸的理化性质——核酸的紫外吸收 2、增色效应与减色效应 有时核酸溶液的紫外吸收用摩尔磷吸光度表示，根据磷含量及紫外吸收值然后算出摩尔磷吸光系数。 ?(P)=A/cL =30.98A/WL 一般天然DNA的?(P)为6600，RNA为7700~7800。由于单链核苷酸的?(P)比双链的要高，所以核酸发生变性时， ?(P)升高，故称增色效应；复性时?(P)降低，称为减色效应。 三、核酸的理化性质——核酸的变性、复性与杂交 核酸的理化性质——核酸的变性、复性与杂交 核酸的理化性质——核酸的变性、复性与杂交 核酸的理化性质——核酸的变性、复性与杂交 核酸的理化性质——核酸的变性、复性与杂交 3、核酸的分子杂交 * 第14章 核酸的理化性质 核酸的理化性质——一般物理性质 核酸的理化性质——核酸的两性性质 水解 水解 水解 核酸的理化性质——核酸的水解 2、碱水解 核酸的理化性质——核酸的水解 2、碱水解 核酸的理化性质——核酸的水解 2、碱水解 核酸的理化性质——核酸的水解 3、酶水解 非特异性水解多聚核苷酸链中磷酸二酯键的酶称为磷酸二酯酶，特异性水解核酸的磷酸二酯酶称为核酸酶 DNA水解酶（DNases）以DNA为底物，RNA水解酶（RNases）以RNA为底物。 根据作用方式又分作两类：核酸外切酶和核酸内切酶。 核酸外切酶的作用方式是从多聚核苷酸链的一端（3′-端或5′-端）开始，逐个水解切除核苷酸；核酸内切酶的作用方式刚好和外切酶相反，它从多聚核苷酸链中间开始，在某个位点切断磷酸二酯键。 在分子生物学研究中最有应用价值的是限制性核酸内切酶。这种酶可以特异性的水解核酸中某些特定碱基顺序部位。 核酸的理化性质——核酸的水解 3、酶水解 蛇毒磷酸二酯酶和牛脾磷酸二酯酶是从不同末端降解多聚核苷酸的核酸外切酶 3、酶水解 核酸的理化性质——核酸的水解 牛胰核糖核酸酶（RNase I）作用位点为嘧啶核苷-3`-磷酸与其它核苷酸之间的连键，产物为3`-嘧啶核苷酸；或以3`-嘧啶核苷酸结尾的寡核苷酸。 核酸的理化性质——核酸的水解 3、酶水解 限制性内切酶是一类重要的作用于DNA的内切酶 限制性内切酶识别部位一般都是由4-8个碱基对组成的一段序列，而且有一个二重对称轴，即5`-3`方向残基序列在DNA的两条链上是一样的，这样的序列称为回文结构。 E. CoR I是一个重要的限制性内切