悦目金蛛粗毒提取及制备.doc

悦目金蛛粗毒提取及制备 　 作者：陈连水，张浩，袁凤辉，毛月祥，曹宁，朱茫 【摘要】 目的了解掌握悦目金蛛生活习性和形态特征，分析毒腺形态与体量的相关性，优化明确制毒路线，获得较纯生理活性较高的蜘蛛粗毒。方法通过毒腺形态解剖，借助数理统计方法分析了毒腺形态与蜘蛛体量的相关性；采用毒腺解剖法直接获取性质稳定和最多量的蛛毒粗品，以鸡红细胞为模型检验了粗毒效价，探索了毒素离子通道抑制类型。结果毒腺重量与体量呈正相关，按照优化后的制备方法和技术线路，制得5 mg悦目金蛛粗毒；悦目金蛛毒素有促进红细胞凝集和裂解作用，在钙离子环境下毒素对红细胞的裂解作用更强。结论利用毒腺解剖法能够获得最大量更高纯度的蛛毒，初步确定了蛛毒当中含有凝集素和磷脂酶两种成分。 【关键词】 悦目金蛛； 毒腺解剖； 粗毒 ； 细胞毒理 ChinaAbstract：ObjectiveHaving a detailed mastery about the Argiope amoena’ s morphological characteristics and living habits, we analyzed the relevence of poison gland weight and length to its body. Using the optimized method we obtained higher biological properties and more pure venom. Methods We got the relevence of poison gland weight and length to its body using statistical method by anatoming poison gland. Isolating poison gland from spider, obtained stable and maximum amount of venom， we tested titer of venom and explore the type of inhibit ion channels toxin using chicken red blood cells as a model. Results Venom gland’ s weight and body mass were positively correlated. With the optimized mean prepared method, five millingrams of crude venom were got. The venom has effect of promoting red blood cell aggregating and cracking. The blood cell cracked more seriously in the Calcium ions environment. Conclusion More qualified venom can be got by venom gland dissection. We initially know that venom contains phospholipase lectin and agglutinin. 　　Key words：Argiope amoena; Anatomy of venom; Crude toxin; Cell physiology 蜘蛛是害虫的重要天敌，以其毒素麻痹杀死猎物。蜘蛛毒素成分复杂，主要为蛋白质和多胺类物质，蛋白质包括各种多肽神经毒素、细胞毒素、酶、激肽类似物、凝集活性肽和抗菌肽等，多胺类物质有ATP、核苷酸、氨基酸、多胺、单胺类等低分子量物质和无机盐等。蜘蛛毒素具有多种活性，现已证实含有多种特异性多肽配体，可以选择性地和K+、Na+、 Ca2+ 通道的亚型相结合［1～11］。国内梁宋平等［12］对虎纹捕鸟蛛、海南捕鸟蛛和广西大疣蛛的毒素进行了较深入的研究。悦目金蛛Argiope amoena隶属于蜘蛛目园蛛科金蛛属，体中大型，为结网蜘蛛，在我国南方各省均有分布，多出没于夏秋季，以卵袋越冬［13］。由于悦目金蛛多生活在植被繁茂的山区，不易饲养，故关于悦目金蛛毒素的研究少有报道。 　　1 仪器与材料 　　1.1 仪器 　　上海精密A1004电子天平，Olympus CX41显微摄像系统，上海新苗DNP-9052BS-Ⅲ电热恒温培养箱和DHG-9073BS-Ⅲ恒温鼓风干燥箱，湖南星科TGL-16B台式高速离心机，江苏昆山KQ-50DB数控超声波清洗器，北京泰克0610-403体式显微镜，日本三丰560-108 NK20游标卡尺