护骨十五丸抗老年雌性大鼠骨质疏松效果.doc

护骨十五丸抗老年雌性大鼠骨质疏松效果 　【摘要】 目的评估藏药护骨十五丸抗老年雌性大鼠骨质疏松的效果。方法50只雌性22月龄老年大鼠，分为藏药护骨十五丸大、中、小剂量治疗组，雌激素治疗组及老年模型组，连续给药50 d；另6月龄大鼠12只作为青年对照组。观察各组实验大鼠骨形态、骨密度、骨生物力学的改变。结果22月龄雌性大鼠可作为骨质疏松的实验模型；护骨十五丸大剂量治疗组可显著增加骨松质面积、骨皮质指数（30％，15％,Plt;0.05），可显著增加股骨骨密度、股骨的最大变形能力，减少骨钙丢失。结论藏药护骨十五丸对老龄雌性大鼠骨质疏松有显著改善或阻止骨质疏松发展的作用，提示该制剂对女性绝经后期骨质疏松症具有预防和治疗作用。 【关键词】 骨质疏松；老年；雌性大鼠；护骨十五丸 　　骨质疏松症(osteoporosis, OP)是骨骼骨基质和骨矿物质丧失所致的一种骨代谢性疾病，以骨显微结构改变、单位骨体积骨量减少和骨生物力学改变为特征［1］。世界上骨质疏松患者约达2亿人，骨质疏松症成为危害老年人健康的重大公共卫生问题。目前骨质疏松症的临床治疗多以西药为主，如雌激素、降钙素、钙剂、维生素D、二磷酸类及氟化物等［2］，医学上虽开发了较多抗骨质疏松药物，但仍未成为主导疗法［3］。祖国医学是一个丰富的宝藏,对骨质疏松有丰富的论述，认为肾虚是腰腿痛的根本原因，藏药护骨十五丸系杜仲、续断、乳香、没药、雪莲花、西红花等组成，有补肾壮腰、温经活血之功效。本实验主要观察藏药护骨十五丸治疗老年雌性大鼠骨质疏松的效果，以期找到一种预防和治疗骨质疏松的有效药物。 　　1 材料 　　1.1 药物 　　藏药护骨十五丸系杜仲、续断、乳香、没药、雪莲花、西红花等组成,本研究按动物实验要求,取胶丸制备成供试药物(自制)。 　　1.2 动物健康 　　纯种SD大鼠62只，雌性，其中22月龄50只，体重（330±14）g，6月龄大鼠12只，由西安交通大学动物中心提供（国家A级实验动物）。全部大鼠饲养条件一致，自由摄食，喂以大鼠标准饲料（由西安交通大学动物中心提供），饮用蒸馏水。 　　2 方法 　　2.1 老龄大鼠骨质疏松模型的选定 　　为能更确切模拟人类原发性骨质疏松症的发生发展过程，本实验采用老龄未曾生育大鼠作为实验动物模型。50只老龄未经生育大鼠自然饲用常规饲料和蒸馏水22个月，作为老龄大鼠骨质疏松实验模型。 　　2.2 治疗分组及治疗时间 　　采用老龄大鼠实验模型，随机分为5组：大剂量治疗组（A组，剂量：3.5 g/kg，质量分数35%）10只；中剂量治疗组（B组，剂量：1.5 g/kg，质量分数15%）11只；小剂量治疗组（C组，剂量0.5 g/kg，质量分数5%）9只；无措施22月老年模型组〔D组，0.6 g/kg,6.0%(g/g)乳剂〕9只；己烯雌酚组〔E组，0.04 mg/kg,0.4%（mg/g）乳剂〕11只；另6月龄大鼠12只作为青年对照组〔F组，0.6 g/kg，6%（g/g）乳剂〕。其供试液溶剂大、中、小剂量组，老年模型组，己烯雌酚组，青年对照组均用伯洛沙姆制成6.0%(g/g)乳剂，治疗期为50 d。 　　2.3 取材 　　实验动物在20%乌拉坦溶液麻醉〔（0.5 ml·100 g-1）〕下, 腹腔动脉抽血处死，取动物双侧后肢股骨、胫骨，分别固定于4 % 多聚甲醛中或放置于低温冰箱固定和保存。备测骨钙的股骨以纱布包裹后放置于低温冰箱固定和保存。 　　2.4 观察指标与方法 　　2.4.1 组织形态学观察 　　取股骨上段中1/2段, 经4%多聚甲醛固定，8％的中性EDTA脱钙液脱钙40 d，常规石蜡包埋，用9%的多聚赖氨酸处理载玻片，切片，每张6 μm，伊红—苏木素染色。 2.4.2 骨形态学测量 股骨的石蜡切片经HE染色后应用北航医学半自动彩色图像分析系统分析测量。以关节软骨下1 mm的松质骨区域，每张切片测量3个视野（放大倍数 40×，测定面积限定为274 753 μm2），取平均值，测量骨小梁相对面积。 　　2.4.3 骨皮质厚度指数 　　取股骨中部横断面HE染色切片，光学显微镜下测量计算骨皮质厚度指数。计算方法如下： 　　骨皮质厚度指数＝AB+CD/AD 其中AB，CD，AD见图1（4～8个部位处测量后求均值） 。 　　2.4.4 股骨钙含量测定 　　取适量股骨精密称重,置消化罐中,加混合酸(HNO3∶HClO4=4∶1)3 ml,密闭后置烤箱中105℃消化2 h,消化液取不同稀释度分析各元素含量。 钙(Ca)采用Z-8000型塞曼偏振原子吸收分光光度计分析。钙元素分析过程中的质量控制用USEPA和粉质发样进行质控，采取混合血样控制。样品处理过程中尝试了灰化法、试管内混合酸消化法,最终选择了密闭消化罐消化,并做了回收实验,回收率97.4