建立三种基因工程杀蚊幼蓝藻.pdfVIP

第 3卷 第 4期 寄生虫与医学昆虫学报 V0L 3．No．4 1996年 12月 AetaParasito1．M ed．Entomo1．Sin Dec．。1996 建立三种基因工程杀蚊幼蓝藻 闰 歌 刘湘萍．，张晓静 江洪涛 孔任秋 ’b；z · _ — — — — 一 — — — — — 山东省寄生虫病防治研究所基 固工程室，济宁 272I33) 牛·弓／ ／l 摘要 基因工程杀蚊劫蓝藻的应用．为持续控制蚊蚰虫的研究提供丁新的途径 本文将携有球形芽饱杆菌晶体蛋白 ‘ 基N的pDC26穿棱质粒，通过接台转移导人多种鱼腥藻中进行表逃 结果表 明，所得到 的基因工程藻 Anab~enasp．7120 An~ba… Hm 和 Anab~enasubtropic对漩色库蚊劫虫具肯轻高的毒教 ，24h半数致死浓度 (LC5)分别为 ：3．5I×10 导入鱼腥藻 (An~baena)中进行表达 ，建立基因工程杀蚊幼蓝藻用 以杀蚊幼虫的研究取得明 显效果 (Xueta1．，1993；徐旭东等 ，1993)．受到人们的关注 。但是 由于穿梭质粒 pDC9转入 蓝藻的种株有限 ，不能满足 自然界中不同水质生长的不同蓝藻的需要 。因此 ，我们将新构建 的穿梭质粒 pDC26导入多种鱼腥藻 中进行表达 ，建立 了三种基 因工程杀蚊幼蓝藻株 {并对 它们杀淡色库蚊幼虫的效果进行了观察，现将结果报告如下 ： 材料和方法 一 、 穿梭质粒 pDC26 为球形芽孢杆菌晶体蛋 白基因表达质粒，新霉素 【Nm)抗性，可在鱼腥藻和念珠藻 中复 制传代 ，趋动辅助质粒RP+PRL542由C．P．wolk教授惠赠。 二 、藻种和淡色库蚊幼虫 Ana缸Pdsp．7120、A cylidrica和A．subtropic由本室保存 ，使用时用BG11培养液大 量培养，置光照培养箱 ，28C～30℃培养。淡色库蚊幼虫由本所昆虫室饲养提供 。 三、接合转移 按 ElhaiJ．和 WolkC．P．介绍的方法进行大肠杆菌和鱼腥藻的接合转移。将携带有 pDC26、RP]PRL542的三种大肠杆菌与三种受体蓝藻分别混合点于纤维素膜上 ，膜 覆于 BG1l平板 (BG11+琼脂)上，光照培养 ld后 ，转 移至含 25mg／ml新霉素的 BG11平板上， 继续光照培养约 2周 时问，待有接台藻落长出后 ，挑出并转移到新霉素浓度逐渐提高 的 BGJl培养液中，最后转移到新霉素浓度为 25mg／ml的 BGJl中培养 。 本文于 1995年 11月 29日收到 *车课题为 国家 63”青年摹金资助项 目 车文承山东省奇研所程里亮所长 、甄天民主任给予指导．特此一并致谢 ·231 · 寄生 虫 与 医学 昆 虫学 报 第 3卷 第 4期 四、毒 性测试 将筛选 出的工程藻在BGl1培养液中培养．定期取出少量工程藻进行传代，连续传代 5o 余次 ．然后扩大培养进行杀蚊毒效的测定 。将三种工程藻悬液按一定的浓度梯度稀释，加至 脱氯 自来水中观察对淡色库蚊幼虫的毒效 。每盒水体积为 200ml，加 Ⅲ龄库蚊幼虫 25只，每 个浓度设三个重复 ，计数 24h、48h和 72h死亡的蚊幼虫数 ．同时设立空 白对照 五 、基因工程藻中穿梭质粒的稳定性 为检查在不加抗菌素条件下 ，穿梭质粒在三种蓝藻 中的稳定性 ．在不加抗菌素的BG11 平板上划线生长得到单个转基因藻落 ，接种到BG]】培养液中扩大培养。连续传代 3次 ．待 工程藻生长到一定数量．稀释后涂 BGll平板培养单个菌落 ．挑取 1O0个检查对新霉素的抗 性 。 结 一 、 基因