槲皮素抑制胃癌BGC823细胞增殖探究.docVIP

槲皮素抑制胃癌BGC823细胞增殖探究 　 作者：徐永中，范钰，姚广涛，李仪奎 【摘要】 　　目的探讨槲皮素治疗胃癌细胞的作用机制。方法采用不同浓度的槲皮素处理胃癌 BGC823 细胞后，采用四唑盐比色试验检测癌细胞生长，分别以琼脂糖凝胶电泳和 TUNEL 检测癌细胞凋亡，分别采用荧光实时定量 PCR 和 Western blot 检测存活素（survivin）基因mRNA、蛋白表达情况。结果槲皮素抑制胃癌 BGC823 细胞的恶性增殖，且呈浓度依赖性；琼脂糖凝胶电泳和 TUNEL显示，槲皮素处理组出现凋亡现象，且呈浓度依赖性。槲皮素处理组 survivin 基因 mRNA、蛋白表达下调，且呈时间和浓度依赖性。结论槲皮素体外能抑制胃癌细胞的恶性增殖，与诱导凋亡、下调 survivin 基因表达有关。 【关键词】 胃肿瘤 槲皮素 细胞凋亡 存活素 　　Abstract：ObjectiveTo identify the inhibitory effects and mechanism of Quercetin on gastric cancer.MethodsGastric cancer BGC823 cells were treated with different doses of quercetin,and the growth of cancer cell was exmined by MTT assay,and the apoptosis were determined by agarose gel electrophoresis and TUNEL assays,respectively.The real time-PCR and western blot were performed to study the expression of survivin.ResultsQuercetin had a remarkable inhibition on gastric cancer cell line BGC823.From DNA ladder and TUNEL assay,apoptosis were induced in cancer cells treaed with quercetin,in a dose- dependent manner.In addition, quercetin resulted in down-regulation of survivin mRNA and protein from real time-PCR and western blot assay.ConclusionQuercetin can inhibit the growth of human gastric cancer BGC823 cell through inducing apoptosis and down-regulating survivin gene in vitro. 　　Key words：Gastric cancer; Quercetin; Apoptosis; Survivin 　　胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，发现时一般已经处于中晚期，目前尚缺乏有效的治疗手段，故寻找有效的治疗药物和治疗手段是当务之急。槲皮素(quercetin)是一种天然的黄酮类化合物，广泛分布于蔬菜、水果及常见中草药之中。已有研究发现，槲皮素可抑制多种肿瘤细胞的增殖［1，2］，是颇具应用前景的抗癌药物之一，但内在机制尚不清楚，且目前尚无对胃癌细胞作用的报道。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　槲皮素，购自 Sigma 公司，用 DMSO (二甲基亚砜)配成储液，-20℃冰箱保存。实验时用 1640 培养基稀释，DMSO 的最终浓度小于 0.9%。人胃癌细胞株 BGC823 购自中科院上海细胞所细胞库。TriIzol 试剂购自 Invitrogen 公司。BCA 蛋白分析试剂盒购自 PIERC E公司。细胞凋亡原位检测试剂盒，购自 Roche 公司。 　　1.2 细胞培养及处理胃癌 BGC823 细胞在37℃，5% CO2 培养箱中培养，培养液为含 10% 小牛血清、100 U/ml 青霉素和 100 μg/ml 链霉素的 RPMI-1640（美国GIBCO BRL）。待细胞至指数生长期，收集细胞，调整细胞浓度为1×104/ml，按每孔 0.1 ml 接种到 96 孔培养板中，24 h 后，分别加入不同浓度的槲皮素，设 3 个复孔，培养 48 h ，每孔加入 MTT 100 μl，作用 4 h 后，加入 DMSO100 μl，孵育 30 min ，在酶标仪 570 nm 处测吸光度A值，计算抑制率。 　　1.3 细