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海带多糖含量测定方法正确性探究 　作者：张忠山，张全斌，王晶，李智恩，徐祖洪 【摘要】 　　目的探索正确测定海带多糖含量的方法。方法采用苯酚-硫酸法，按照不同糖溶液配制标准液在485 nm处测定多糖含量。结果按照多糖中褐藻糖与半乳糖比例为标准测得多糖含量为60.42%，介于两种组成单糖测定结果之间。结论按照多糖中单糖组成比例为标准测定多糖含量具有可比性，可用于海带多糖含量测定。 【关键词】 海带 多糖 苯酚 硫酸法 　　Abstract：ObjectiveTo determine the content of polysaccharides in Laminaria japonica . MethodsWe used the method of vitrilic colorimetry, and detection wavelength was 485 nm.ResultsThe content of polysaccharides with the method which was according to the composing sugars was 60.42%. Conclusion This method can be used to determine the content of polysaccharides in Laminaria japonica. 　　Key words：Laminaria japonica; Polysaccharides ; Phenol-vitriolic colorimetry 　　海带Laminaria japonica，又名纶布、昆布、江白菜，是多年生大型食用藻类。藻体为长条扁平叶状体，褐绿色，有两条纵沟贯穿于叶片中部，形成中部带，一般长1.5～3 m，宽15～25 cm，最长者可达6 m，宽可达50 cm 。海带生于海边低潮线下2 m 深度的岩石上，人工养殖生长在绳索或竹材上，是我国、日本、朝鲜等东方人喜欢食用的经济藻类。我国海带养殖已发展成大规模产业，从辽宁一直到广东沿海，产量约占世界海藻的50％，居世界第1位。海带成本低廉，功能众多，在有益物质提取和食品加工中作用明显，市场潜力很大［1］。 　　海带富含多种功能性成分，如碘、甘露醇、维生素A、维生素B、维生素C、牛磺酸、海带多糖等，其食用和药用价值很早即为世人所关注［2］。研究表明，海带对外界恶劣环境所表现出来的抗逆耐受能力与它们所含的海带多糖有直接关系，海带多糖还具有稳定细胞膜和蛋白质结构的功能。海带多糖在医药、食品、化妆品、农业等方面也具有广阔的应用前景［3］。我国在对海带多糖的研究中所用的实验材料多是粗制品，缺乏纯化和组成鉴定过程，对海带的利用也局限于提取褐藻酸、甘露醇等。许多文献中，测定海带多糖时用葡萄糖或其组成的主要单褐藻糖作标准溶液，造成结果与真实值相差太大。本文采用水提醇沉的方法对海带多糖的进行提取、纯化，并采用按照组成样品的单糖比例配制标准液的测定方法对其多糖含量进行测定，对几种测定方法进行比较和准确性评价。 　　1 材料与仪器 　　海带采自青岛沙子口，经鉴定为 Laminaria japonica；95％乙醇、浓硫酸、六水合氯化镁、氢氧化钠、三氟乙酸、盐酸羟胺等均为国产分析纯；5%苯酚（现配）；L－褐藻糖（Sigma公司）；D-阿拉伯糖、D-半乳糖、D-木糖、D-甘露糖、L-鼠李糖、D-果糖、葡萄糖、蔗糖等均购自于上海试剂二厂；肌醇（无锡默克尔精细化学品有限公司）。高压锅（山东新华医疗器械股份有限公司）；FA1004电子天平（上海天平仪器厂）；722型分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司）；瑞士BüCHI R－114型旋转蒸发仪；东京理化EYELA FD－5N型真空冷冻干燥机；电热恒温水浴锅（天津泰斯特仪器有限公司）；TDL－40B离心机（上海飞鸽系列离心机厂）；HP5890Ⅱ 气相色谱仪（美国惠普公司），氢火焰离子化检测器（FID）。 　　　2 方法与结果 　　2.1 海带多糖样品的制备 　　采用水提醇沉法提取纯化海带多糖样品（自制）。 　　2.2 样品组成单糖的确定 　　2.2.1 气相色谱条件 　　SGE AC225 2.5 mm×30 m弹性石英毛细管柱；柱温215℃ ；进样口温度250 ℃；检测器温度250 ℃；分流比100∶1；高纯氮气为载气，流速1 ml/min。 　　2.2.2 标准糖样衍生物的制备 　　分别称取4～6 mg的L-褐藻糖、D-阿拉伯糖、D-半乳糖、D-木糖、D-甘露糖、葡萄糖、L-鼠李糖以及1 mg的肌醇置1 ml的离心管中，加入10 mg盐酸羟胺和0.5 ml的吡啶，在90 ℃水浴中加热反应30 min，并不时振荡。取出后冷却至室温，加入0.8 ml