益肾饮合雷公藤多苷对肾炎大鼠卵巢病理及一氧化氮合酶影响.docVIP

益肾饮合雷公藤多苷对肾炎大鼠卵巢病理及一氧化氮合酶影响 　 作者：于俊生，王瑶瑶，杜雅静 【摘要】 　目的 探讨益肾饮拮抗雷公藤多苷对雌性大鼠系膜增生性肾小球肾炎性腺损害的作用机制。方法 实验大鼠随机分为正常对照组、模型组、雷公藤多苷组、益肾饮组、雷公藤多苷和益肾饮合用组。制备大鼠系膜增生性肾小球肾炎模型；以雷公藤多苷和益肾饮灌胃；观察各组大鼠卵巢病理变化，卵巢中一氧化氮合酶(NOS)的表达。结果 益肾饮和雷公藤多苷各自治疗和合用治疗大鼠系膜增生性肾小球肾炎后，雷公藤多苷组卵巢脏器指数降低，病理改变明显,NOS表达减弱；益肾饮与雷公藤多苷合用组性腺损害不明显。结论 益肾饮通过影响卵巢NOS活性来改善雷公藤多苷对卵巢组织的损害。 【关键词】 系膜增生性肾小球肾炎；益肾饮；雷公藤多苷；卵巢；一氧化氮合酶；大鼠 　研究发现，雷公藤的自身免疫治疗剂量明显高于其有效抗生育阈剂量［１］，说明雷公藤在发挥免疫抑制作用的同时，不可避免地影响到生殖功能。我们在既往的研究中证实，益肾饮合雷公藤多苷治疗慢性肾炎有减毒增效的作用［23］。本实验选用慢性系膜增生性肾小球肾炎模型大鼠，探讨益肾饮拮抗雷公藤多苷对系膜增生性肾炎雌性大鼠性腺损害的作用机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物与分组 清洁级Wistar雌性大鼠25只，6～8周龄，体重(200±20)g，由山东省鲁抗动物房提供(。于室温23℃,用标准大鼠饲料喂养。造模前预养1周，随机分为正常对照组、模型组、雷公藤多苷组、益肾饮组、雷公藤多苷与益肾饮合用组(以下简称合用组)，每组5只。 　　1.2 药品与试剂 益肾饮:当归15 g，赤芍15 g，川芎10 g，茯苓15 g，泽泻10 g，白术15 g，熟地黄15 g，肉苁蓉15 g(由青岛市海慈医疗集团制剂科配制)，含生药2.2 g/mL。按大鼠100 g体重每天用量2.2 g。雷公藤多苷：10 mg/片(由浙江普洛康裕天然药物有限公司提供)，配成2.4 mg/mL；按大鼠100 g体重每天用2.4 mg。牛血清白蛋白(BSA)购自瑞士罗氏公司；弗氏佐剂购自美国sigma公司;一抗(iNOS)兔抗鼠多克隆抗体，二抗：羊抗兔iNOS，PV9000均购自武汉博士德生物技术有限公司。 　　1.3 系膜增生性肾小球肾炎大鼠模型建立［４］ 4组大鼠适应性喂养1周，腹腔注射10%水合氯醛(3 mL/kg)麻醉，常规消毒后经背部切除左侧肾脏，休养1周。大鼠足垫皮下注射完全弗氏佐剂0.1 mg加3 mg BSA,于1、2周末加强2次。3周末，腹腔连续4次注射BSA，间隔时间为1 h，注射剂量分别为每只0.5、1.0、1.5、3.0 mg；次日晨加强1次(2.0 mg/只)。之后每日腹腔注射BSA,剂量从每只0.5～5.0 mg开始，每日增加0.5～5.0 mg,继续每周加量1 mg至10 mg为止。正常对照组大鼠，手术造模时开腹游离左侧肾脏后关腹,药物造模时给予相应剂量的生理盐水注射。造模5周时，雷公藤多苷组、益肾饮组、合用组分别用相应药物灌胃,共灌胃8周。正常对照组和模型组灌以相同剂量的生理盐水。 　　1.4 观察指标 　　1.4.1 卵巢组织的病理变化 　　于12周末宰杀大鼠后取卵巢以滤纸吸干用分析天平称重，计算卵巢脏器指数。之后取子宫置于10%的中性甲醛固定液中固定，进行病理切片、光镜HE染色测定。 　　1.4.2 免疫组化染色步骤(PV9000二步法)(略) 　　1.5 统计学方法 所有数据用均数±标准差(±s)表示，应用SPSSl3.0软件进行统计学分析，计量资料采用单因素方差分析，计数资料用行平均方差分析。 　　2 结果 　　2.1 各组性腺脏器指数的变化 见表1。 　　2.2 卵巢和子宫组织病理改变 　　2.2.1 卵巢 光镜下，正常对照组和模型组卵巢组织结构正常,可见各级生长卵泡、成熟卵泡及黄体。成熟卵泡中可见卵丘、卵泡液及卵细胞，卵泡液丰富，颗粒细胞层次多；黄体发育好。雷公藤多苷组大鼠卵巢较正常对照组和模型组略偏小，可见生长卵泡、成熟卵泡及黄体，成熟卵泡数、黄体数较少，卵泡较小，颗粒细胞层次较少，黄体偏小。益肾饮和合用组卵巢可见各级生长卵泡、成熟卵泡及黄体。颗粒细胞层次多，黄体发育好。 　　　表1 各组性腺脏器指数变化情况（略） 　　注：12周末，雷公藤多苷组与各组比较，#P＜0.01 　　2.2.2 子宫 正常对照组和模型组大鼠子宫管径均匀，内膜被覆高柱状上皮,浆内有核下空泡；腺体丰富，腺体呈圆形、椭圆形，腺体上皮呈高柱状。雷公藤多苷组大鼠子宫管径细，内膜上皮薄，腺体含量少；子宫肌层较正常对照组薄，肌纤维排列较稀疏。益肾饮组和合用组大鼠子宫管径正常，内膜被覆高柱状上皮，腺体丰富。 　　 　　采用动物图像分析系统，