祖卡木颗粒中罂粟碱含量反相高效液相色谱法测定.docVIP

祖卡木颗粒中罂粟碱含量反相高效液相色谱法测定 　 作者：李焕丹，季志红，刘峰，田佳佳，周宏兵 【摘要】 　　目的采用反相高效液相色谱（RPHPLC）法测定祖卡木颗粒中罂粟碱的含量。方法使用DIKMA C8色谱柱（250 mm×4.6 mm，5μm），甲醇乙腈1%三乙胺1%乙酸铵（40∶20∶1∶39）为流动相，流速1 ml/min，检测波长为240 nm。结果罂粟碱在0.019 8～0.396μg范围内呈良好线性关系（r＝0.999 9），平均回收率为99.6%，RSD为1.5%。结论该法灵敏、准确，专属性强，重复性好，可以作为祖卡木颗粒的含量测定方法。 【关键词】 祖卡木颗粒 高效液相色谱法 罂粟碱 　　Abstract:Objective To establish a method for determining papaverine in Zukamu Granules.MethodsThe separation was carried out on DIKMA C8 column（250 mm×4.6 mm，5 μm）.The mobile phase was carbinol-acetonitrile-1% triethylamine -1% ammonium acetate（40∶20∶1∶39）with a flow rate of 1.0ml/min.The detection wavelength was set at 240 nm.ResultsPapaverine showed a good linear relationship in the range of 0.0198～0.396μg（r＝0.999 9）and the average recovery was 99.6% ,RSD was1.5%.ConclusionThe method is sensitive,accurate, specific and repeatable. It can be used for quality control of Zukamu Granules. 　　Key words：Zukamu Granules; HPLC; Papaverine 　　由山柰、睡莲花及罂粟壳等药味的提取物组成的祖卡木颗粒，具有清热、发汗、通窍的功效，用于感冒咳嗽、发热无汗、咽喉肿痛、鼻塞流涕等症。方中罂粟壳含有罂粟碱，久服易成瘾，过量摄入会引起心率不齐，严重时致人死亡。文章研究采用反相高效液相色谱法测定罂粟碱的含量，为控制祖卡木颗粒的质量提供依据。 　　1 仪器与试药 　　1.1 仪器 　　岛津LC－10AT高效液相色谱仪（日本岛津公司），HW-2000色谱工作站，C8柱（250mm×4.6mm，5μm）（迪马公司），超声清洗提取器。 　　1.2 试药 　　甲醇为色谱纯（天津四友生物医学技术开发公司），水为超纯水，余试剂为分析醇，盐酸罂粟碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：171214－200403）。 　　2 方法 　　2.1 色谱条件 　　C8色谱柱，甲醇-乙腈-1%三乙胺-1%乙酸铵（40∶20∶1∶39）为流动相，流速1 ml/min，检测波长为240 nm。 　　2.2 供试品溶液的制备 　　取本品约2.5 g，精密称定，置100 ml具塞锥形瓶中，加入氨试液10 ml润湿碱化后，加三氯甲烷50 ml，振摇5 min，超声80 min后移至分液漏斗中，静止分层，分取三氯甲烷层，水层用30 ml三氯甲烷分3次萃取，合并三氯甲烷溶液，水浴挥干三氯甲烷，残渣用甲醇溶解并移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，进柱前用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。 　　2.3 对照品溶液的制备 　　取盐酸罂粟碱适量，105℃下干燥2 h，精密称定，加甲醇制成每毫升含39.6 μg的溶液，作为对照品溶液。 　　2.4 阴性对照溶液的制备 　　去除祖卡木颗粒处方中的罂粟壳，按祖卡木颗粒生产工艺制备阴性制剂，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。 　　3 结果 　　3.1 干扰实验 　　照上述色谱条件，分别取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照溶液各20 μl，注入色谱仪，记录色谱图，图中显示，盐酸罂粟碱的峰形良好，且与样品杂质峰完成分离，阴性对照溶液无干扰。结果见图1～3。 　　3.2 线性范围实验 　　分别精密吸取一定量的对照品溶液稀释成浓度为0.99，1.98，2.97，4.95，9.90，14.85，19.80μg/ml的标准溶液。按上述色谱条件分别进样20μl，取3次峰面积的平均值，对盐酸罂粟碱的进样量（μg）进行线性回归，得回归方程Y = 4563.5X + 18009（r=0.999 9，n=7）结果表