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c19orf18蛋白的表达与纯化及多克隆抗体制备-生物技术通报
生物技术通报
·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( )
2017, 33 5 :176-182
C19orf18蛋白的表达与纯化及多克隆抗体制备
1 1 2 2 2 2，3
童霄霞 杨远勤 陈勉 王怀远 胡海军 章康健
（1. 浙江理工大学，杭州 310018 ；2. 中国科学院上海生命科学研究院生化细胞所，上海 200031 ；3. 四川辉阳生命工程股份有限公司，成都
610021）
摘 要 ： 旨在得到较高浓度和纯度的C19orf18 蛋白，再将得到的目的蛋白用于制备其特异性的多克隆抗体。利用PCR 技术
扩增出C19orf18 基因的胞内段和胞外段，中间用柔性肽连接，再将目的片段克隆到pET28a（+）与pET32a（+）载体上，通过诱
导表达少量的目的蛋白，筛选出表达量较高的载体，再用筛选得到的表达量较高的载体大量表达目的蛋白，通过镍柱纯化得到较
纯的C19orf18 蛋白。用得到的蛋白免疫新西兰白兔，得到的抗血清先经过Protein A 纯化，再进行抗原亲和纯化得到C19orf18 蛋白
多克隆抗体。结果显示，载体pET28a-C19orf18 蛋白表达量高于pET32a-C19orf18，经过镍柱纯化后得到了较高浓度与纯度的目的蛋白，
利用得到的目的蛋白作为抗原成功制备了其特异性的多克隆抗体。在原核细胞中成功表达了C19orf18 重组蛋白，并得到了其特异
性多克隆抗体，所制备的多克隆抗体可应用于ELISA、蛋白免疫印迹实验。
关键词 ： C19orf18 蛋白 ；原核表达 ；抗原亲和纯化
DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2016-1031
，
Prokaryotic Expression Purification and Preparation of Polyclonal
Antibody of C19orf18 Protein
1 1 2 2 2 2，3
TONG Xiao-Xia YANG Yuan-Qin CHEN Mian WANG Huai-Yuan HU Hai-Jun ZHANG Kang-Jian
-
（1. Xinyuan Institute of Medicine and Biotechnology ，Zhejiang Sci Tech University ，Hangzhou 310018 ；2. State Key Laboratory of Cell
Biology ，Shanghai Institute of Biochemistry and Cell Biology ，Shanghai Institutes for Biological Sciences ，Chinese Academy of Sciences ，
Shanghai 200031 ；3. Sichuan Huiyang L
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