联合应用阿霉素及姜黄素增强人白血病细胞株HL60对阿霉素敏感.doc

联合应用阿霉素及姜黄素增强人白血病细胞株HL60对阿霉素敏感 　 作者：王磊 柯红 王一羽 任东明 【摘要】 　目的研究姜黄素是否增强人白血病细胞株HL60对阿霉素的敏感性及其作用机制。方法采用MTT法测定药物的体外杀伤作用，应用流式细胞术分析细胞凋亡。应用RTPCR和Western blot 检测Survivin和XIAP基因的表达。结果姜黄素（2.00～16.00 μmol·L-1）和阿霉素（0.08～0.64 μmol·L-1）同时给药对HL-60细胞可产生增强的协同杀伤效果，同时，细胞凋亡增加，Survivin和XIAP的表达下降。结论联合应用阿霉素和姜黄素可以增强人白血病细胞株HL60对阿霉素的敏感性，下调生存蛋白（Survivin）和X-相关凋亡抑制蛋白（XIAP）表达促进细胞凋亡是其主要作用机制。 【关键词】 姜黄素； 阿霉素； 协同作用； 生存蛋白； X-相关凋亡抑制蛋白 　　Abstract：ObjectiveTo investigate the effect of curcumin on the sensitivity of human leukemia cell line HL-60 to adriamycin. MethodsCytotoxicity was determined by the colorimetric MTT viability/proliferation assay. Apoptosis was assessed by flow cytometry. The mRNA levels of survivin and XIAP were measured by RT-PCR. The protEin levels of survivin and XIAP were measured by Western blot. ResultsSimultaneous administration of curcumin(2.00～16.00 μmol·L-1) and adriamycin(0.08～0.64 μmol·L-1) resulted in synergistic cytotoxicity and apoptosis for HL-60 cells. Meanwhile, cell apoptosis was increased and the mRNA and protEIn levels of Survivin and XIAP were significantly down-regulated. ConclusionCurcumin can sensitize human leukemia cell line HL-60 to adriamycin-mediated apoptosis. Down-regulation of Survivin and XIAP gene expression and promoting cell apoptosis are main mechanisms. 　　Key words：Curcumin; Adriamycin; Synergistic effect; Survivin; XIAP 　　阿霉素(Adriamycin, ADR)是目前 治疗 白血病的一线药物，对白血病有着较好的疗效，但是心脏和造血系统毒性限制了它的使用。姜黄素（curcumin, Cur）是姜科植物姜黄的主要有效成分，具有抗炎、抗氧化、抗凝、降血脂、抗动脉粥样硬化及抗癌作用［1］，且长期应用无明显毒副反应。基于以上两药特点，本实验在体外联合使用阿霉素与姜黄素，观察其对人白血病细胞株HL-60的生长抑制作用，并探讨其与抗凋亡蛋白生存蛋白（survivin）和X-相关凋亡抑制蛋白（XIAP）的关系，阐明姜黄素增强人白血病细胞株HL-60对阿霉素敏感性的可能机制，为临床联合使用阿霉素与姜黄素提供理论基础。 毕业论文 　　1 材料和方法 　　1.1 药物和试剂 人白血病细胞株HL-60为本室保种，常规培养。姜黄素、阿霉素和MTT为Sigma公司产品，RPMI 1640培养基和小牛血清为Gibco公司产品，其余试剂均为分析纯。鼠抗人X－连锁凋亡抑制蛋白(X-linked IAP, XIAP) 单克隆抗体和鼠抗人存活素(Survivin)单克隆抗体均购自Santa Cruz 公司。 论文代写 　　1.2 同时联合用药对HL-60细胞的杀伤作用HL-60细胞悬液2×104/well，接种于96孔板，药物组每孔加不同浓度药液，阴性对照组加等剂量溶剂，每个浓度重复4孔，无细胞孔为背景，置5％CO2，37℃培养48 h后每孔加0.