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致病性猪沙门菌四环素耐药基因tetBPCR检测 　 作者：刘维红 徐引弟 郭爱珍 贾爱卿 刘军发 陈焕春 【关键词】 ,沙门菌；,,,四环素耐药基因；,,,tetB；,,,PCR；,,,猪 　　摘要： 目的 检测临床分离猪源致病性沙门菌四环素的耐药基因，确定沙门菌四环素耐药基因类型。方法 用KB法测定分离株对四环素等21种抗生素的耐药情况，用PCR方法检测四环素耐药基因tetA、tetB、tetC、tetD、tetE、tetG及tetK，并对扩增产物进行测序。结果 临床分离株全部对四环素耐药，33株沙门菌中有29株扩增出tetB特异性片段，基因序列与参考菌的同源性为99%，tetB检测与药敏试验阳性符合率为879%。结论 tetB的PCR检测对四环素耐药性具有较高的特异性，tetB基因是决定本试验中临床分离株四环素耐药的主要基因，为四环素耐药性的分子流行病学监测提供了依据。 　　关键词： 沙门菌； 四环素耐药基因； tetB； PCR； 猪 　　PCR amplification of tetB gene for　pathogenic Salmonella isolated from diseased pigs 　　ABSTRACT Objective To detect the tetracycline resistance genes for 33 Salmonella isolates from diseased pigs and define the tetracycline resistance determinants. Methods The resistance of Salmonella isolates were detected by drug susceptibility tests with KirbyBauer (KB) diffusion method. PCR was designed to detect tetA, tetB, tetC, tetD, tetE, tetG and tetK. The amplified products were sequenced and alignment analysis was performed. Results The detection of tetracyclineresistance of 33 Salmonella isolates showed the resistance rate was 100%, but only the tetB was amplified from 29 of 33 isolates. The gene fragment shared 99% homology in nucleotides with the reference sequence. The result of PCR amplification was 879% identical with that of the drug resistance test. Conclusion The tetB was the main determinant responsible for tetracycline resistance in this study and PCR detection of tetB is a specific and reliable method for molecular epidemiology of tetracycline resistance in Salmonella. 　　KEY WORDS Salmonella; Tetracyclineresistance genes; tetB; PCR; Pigs 　　自20世纪40年代抗生素问世以来，它在各种常见细菌性疾病的治疗中发挥了不可磨灭的作用。但随着兽用抗生素在养殖业的广泛应用，它的不良影响和对人类的伤害逐步显现出来［1］。在人和动物的肠道内存在着许多相互制约、处于平衡状态的正常菌群，长期过度使用抗生素导致菌群失调，产生耐药菌群，即便已经停止使用相应抗生素，这些耐药菌仍然继续传播耐药性。同时致病菌的耐药性可导致原本有效的抗生素临床治疗失败［2］。四环素作为一种廉价的广谱抗生素，几乎占领了三分之二的兽药领域。随着它的广泛应用，其耐药性便成为首当其冲的问题［3］。沙门菌是一种重要的肠道病原菌，分布广，危害大，动物沙门菌是世界各地人类食物中毒的主要致病菌［4］，因此，动物沙门菌的多重耐药性对动物与人类健康造成严重威胁。检测四环素耐药基因(tet)是监测四环素耐药性的重要手段。细菌的四环素耐药基因有数十种之多，随着细菌与宿主种类、地理环境不同而呈现多样性分布［5～8