茅苍术药材高效液相色谱-蒸发光散射检测指纹图谱探究.docVIP

茅苍术药材高效液相色谱-蒸发光散射检测指纹图谱探究 　 作者：贾晓东 赵兴增 王鸣 郭可跃 赵友谊 冯煦 【摘要】 　　目的研究茅苍术的HPLC-ELSD指纹图谱。方法高效液相色谱法，蒸发光散射检测器(ELSD)，水（0.25%乙酸）-乙腈梯度洗脱；流速0.6 ml/min；柱温30℃。ELSD条件：不分流；漂移管温度112.8℃；空气流量3.1 L/min。结果共有10个共有峰，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A版）》得出了茅苍术药材的对照指纹图谱。精密度、稳定性、重复性实验中各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均lt;3％。结论 该指纹图谱方法简便、重复性好，为有效地控制茅苍术药材的内在质量提供了科学依据。 【关键词】 茅苍术 指纹图谱 高效液相色谱 蒸发光散射 　　苍术为菊科植物茅苍术Atractylodes lancea (Thunb.) DC.或北苍术Atractylodes chinensis (DC.) Koid Z.的干燥根茎［1］。始载于《神农本草经》，苍术性辛、苦、温，归脾、胃、肝经，具有燥湿健脾、祛风散寒、明目作用。主治脘腹胀满、泄泻、水肿、风湿痹痛、风寒感冒等，中医临床使用历史悠久。其中尤以产于江苏茅山地区的茅苍术品质最好。茅山地区是茅苍术的道地产区。但近年来国际市场对苍术的需求量日益增加，茅苍术被掠夺性采挖，加之对茅苍术生态环境的人为破坏，造成茅苍术资源的枯竭，使其濒于灭绝［2］。为了保护这一珍贵资源，需对其优良品质进行分析。查阅相关文献发现对茅苍术传统意义上的活性部位－挥发油的研究，未发现与道地性的直接联系，所以我们选取了茅苍术的水溶性部分进行初步的指纹图谱的研究。由于茅苍术水溶性部位含有的主要成分为无紫外吸收单萜苷类，故选用蒸发光散射检测器，获得了良好而稳定的结果。按照国家药品监督管理局2000年颁发的“中药注射剂指纹图谱技术要求”的有关规定［3］，对产于江苏茅山地区的不同采集地点的10批茅苍术进行了HPLC－ELSD指纹图谱方法的建立。建立其指纹图谱是为了反映其质量情况，为建立稳定、可靠、全面的质量控制方法提供科学依据。 　　1 材料与仪器 　　1.1 样品本实验植物样品包括茅苍术Atractylodes. lancea (Thunb.) DC.10份，南苍术2份，北苍术、白术各1份，其编号、采摘地点及采摘时间等见表1。样品采收后洗净切小块，在55℃下烘干备用。 　　1.2 对照品苍术苷A，3，4，11，14-四羟基愈创-9-烯-11-O-β-D-吡喃葡糖苷，纯度≥98％，本课题组分得。 　　1.3 试剂及仪器乙腈：HPLC级；乙酸：AR级；去离子水。Agilent 1100液相色谱仪，HP Chemstation色谱工作站，Alltech ELSD 2000ES蒸发光检测器，Agilent INTERFACE 35900E 数模转换器，XWK-Ⅲ无油空气泵，Phenoxmenex Synergi Hydro-RP 80A柱（4.6 mm×250 mm，4 μm）加C18预柱。 　　2 方法 　　2.1 色谱条件经方法学研究确定色谱条件，流动相A：水（含0.25%乙酸），B：乙腈。梯度洗脱程序见表2。柱温30℃；流速0.6 ml/min；进样量：30 μl。ELSD采用不分流模式，漂移管温度112.8℃，空气流量：3.1L/min。 　　表1 植物样品的采集情况（略） 　　表2 梯度洗脱程序（略） 　　2.2 供试液制备取如上干燥植物样品，粉碎，过40目筛。精密称定2 g，置索氏提取器中，加80 ml正己烷水浴加热回流脱脂8 h。弃去正己烷液，取出样品纸包待正己烷挥发至干，再加80 ml甲醇提取8 h。将甲醇提取液减压蒸至小体积，甲醇定容至10 ml，用0.45 μm微孔滤膜滤过后备用。 　　2.3 参照物标准液制备精密称取苍术苷A，3，4，11，14-四羟基愈创-9-烯-11-O-β-D-吡喃葡糖苷对照品，甲醇定容配成2.94及1.00 mg/ml的原液备用。 　　2.4 稳定性实验取茅苍术04号样品供试液，分别在0，4，8，12，24 h检测指纹图谱。结果各色谱峰的相对保留时间和峰面积比值基本一致，RSD＜3％，供试品溶液在24 h内稳定，符合指纹图谱技术要求。 　　2.5 精密度实验取茅苍术03号样品供试液，连续进样5次，检测指纹图。比较各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积，结果表明各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积基本一致，RSD＜3％，符合指纹图谱的检测要求。 　　2.6 重复性实验取茅苍术09号样品5份，按供试品溶液制备方法制备供试品，检测指纹图。并分别按上述液相条件测定，对共有峰的相对保留时间和相对峰面积进行统计，5份供试品溶液的RSD＜3％，符合指纹图谱