药物毒性的代谢组学研究-中国药理学会毒理学研讨会.ppt

异烟肼和利福平联合用药致肝毒性增加的代谢组学 近十年来，结核病发病率在全球范围内出现严重反弹。异烟肼(isoniazid，INH)和利福平(rifampin，RFP) 是WHO推荐的标准抗结核化疗方案中不可替代的一线抗结核药。 两药联合对杀灭结核杆菌有协同效果，可延缓耐药性的产生。但联合用药可明显增加肝毒性，甚至可发生严重的药物性肝炎，出现致命的急性肝坏死并肝功能衰竭。 关于RFP与INH合用肝毒性增加的机制研究已有30多年，但目前在很多方面，还未得到公认和肯定。 INH与RFP联合用药对大鼠体重和肝指数的影响 INH和RFP单独及联合用药对大鼠肝匀浆MDA、总巯基、非蛋白巯基和蛋白巯基含量的影响 INH和RFP单独及联合用药对大鼠微粒体细胞色素P450含量及P4502E1活性的影响 关木通的肾毒性 关木通 马兜铃科马兜铃属植物东北马兜铃的干燥藤茎 含马兜铃酸（aristolochic acid）Ⅰ、Ⅳ、B、D，马兜铃甙（aristoloside），青木香酸（debilic acid） “中草药肾病” “马兜铃酸肾病” 含有马兜铃酸的中草药（广防己、关木通等）引起的肾功能损害： 贫血、肾性糖尿 肾间质纤维化、肾小管破坏 肾小管性蛋白尿 国内外反应： 许多国家禁止进口和销售含马兜铃酸的中药 国家药品监管局取消关木通药用标准 “龙胆泻肝丸”换方 关木通致肾脏组织病理学变化 (A)雄性Wistar大鼠对照和（B）连续给药6天（ 36g/kg）后的大鼠的尿样的600兆NMR氢谱 雄性Wistar大鼠ig连续给药 (36g/kg）6天，其尿样的600兆NMR氢谱岁时间的变化。 PCA分析结果 对照组(B)与给药组(A)（28g/kg/d）第6天的尿样的PCA分析结果 PCA分析结果 loading 图 PCA分析结果 对照组(B)与给药组(A)（36g/kg/d）第8天的尿样的PCA分析结果 PCA分析结果 loading 图 结 论 致 谢 该项目受到国家自然科学基金、国家863计划(2002AA2Z342D)、军事医学科学院创新基金(2003A)的资助。 参加本项目的成员有：颜贤忠、廖艳、赵剑宇等。 taurine 3.26 citrate 2.54 ? citrate 2.7 ? citrate 2.7 2-OG 3.02 glucose 3.66 citrate 2.7 ? taurine 3.42 citrate 2.66 2-OG 3.02 taurine 3.26 2-OG 2.46 citrate 2.54 citrate 2.66 succinate 2.42 ? 2-OG 2.46 ? citrate 2.54 PCA 结果 代谢产物 1H谱的化学位移(δ) PCA 结果 代谢产物 1H谱的化学位移(δ) PCA 结果 代谢产物 1H谱的化学位移(δ) INH和RFP组 RFP组 INH 组 ：与对照比较，代谢产物浓度增加； ：与对照比较，代谢产物浓度降低 2－OG：2－oxoglutarate 表3 1H NMR检测INH和RFP单独及联合用药组化学位移变化的PCA结果 结果表明： ·对NMR谱图进行主成分分析（PCA）发现， INH和RFP单独及联合用药组与对照组在分值散点图中呈聚类型分布，各组间未见重叠，可明显分离； ·代谢产物谱与血液生化、肝脏脂质过氧化、肝脏微粒体酶活性及组织病理学具有良好的相关性； · 尽管使用传统生物分析方法较容易检测到一些代谢物，但是药物处理组尿液的NMR谱图却可以提供毒物所诱发生化紊乱的显著特征性信息和时效模式。 ·通过600MHz 1H NMR检测INH 与RFP单独及联合用药组尿液的生化组成的显著变化。 · INH- :牛磺酸( )*, 柠檬酸( ), 葡萄糖( ) ·RFP-: 2-酮戊二酸( ), 柠檬酸盐( ) ·INH+RFP: 牛磺酸( ) * , 琥珀酸盐( ), 2-酮戊二酸 ( ), 柠檬酸盐( ) *尿液中牛磺酸浓度的增加被公认为是肝中毒的标志。 实验设计 剂量设计：36 g/kg；32 g/kg； 28 g/kg；control 实验动物：Wistar 大鼠 给药时间 : 6d Rats treated with drug for 6 days. **P0.01, compared with control. 关木通对大鼠血浆生化指标的影响 BUN(mM/L) Crea(μmol/L) CON