马铃薯甲虫3个烟碱型乙酰胆碱受体琢亚基基因的-南京农业大学学报.PDFVIP

摇 南京农业大学学报摇 2014,37(3):65-71 http:/ / 摇 Journal of NanjingAgricultural University doi:10.7685/ j.issn.1000-2030.2014.03.009 試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試 李晨歌,琚阳,韩召军,等.马铃薯甲虫3个烟碱型乙酰胆碱受体琢亚基基因的克隆及表达分析[J].南京农业大学学报,2014,37(3):65-71 马铃薯甲虫3个烟碱型乙酰胆碱受体 琢亚基基因的克隆及表达分析 李晨歌,琚阳,韩召军,姜卫华* (南京农业大学植物保护学院/ 农作物生物灾害综合治理教育部重点实验室,江苏 南京210095) 摘要:通过克隆马铃薯甲虫(Leptinotarsa decemlineata)烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)基因的全长序列并分析其时空表达量 差异,为马铃薯甲虫nAChR亚基功能以及对新烟碱类药剂靶标抗性机制的研究提供重要基础。 根据马铃薯甲虫转录组数 据,采用RACE克隆技术获得3个马铃薯甲虫nAChR 琢基因的cDNA全长序列;通过相似性和进化树分析验证这3个基因 的亲缘关系;利用实时荧光定量PCR技术分析这些基因在马铃薯甲虫不同发育阶段和成虫不同部位的表达情况。 本试验 验证并获得3条nAChR 琢亚基片段序列,经BLAST 比对得出其分别属于nAChR 琢4、nAChR 琢7 和nAChR 琢9亚基,进一步 克隆得到这些基因的全长序列,分别命名为Ld琢4、Ld琢7和Ld琢9。 3个亚基基因编码的氨基酸序列与已知的昆虫同源序列 有较高的相似性。 其中Ld琢4、Ld琢7和Ld琢9与赤拟谷盗的相似性最高,分别为87%、89%和47%;Ld琢4、Ld琢7和Ld琢9 亚基 基因在马铃薯甲虫成虫中主要集中于头部和胸部,在蛹期、幼虫和成虫中均有表达,但表达量有明显差异,Ld琢4、Ld琢7 和 Ld琢9分别在成虫、3龄幼虫和蛹期阶段的表达量最高。 克隆获得的3个基因Ld琢4、Ld琢7和Ld琢9具备nAChR琢基因的典型 结构特征,且与赤拟谷盗的相应基因位于同一分支,进一步验证了同为鞘翅目昆虫的亲缘关系。 Ld琢4、Ld琢7和Ld琢9亚基基 因在马铃薯甲虫不同生长阶段的表达量有差异,推测这些亚基基因在马铃薯甲虫的不同生长发育中发挥特定作用。 关键词:马铃薯甲虫;烟碱型乙酰胆碱受体;基因克隆;序列分析;实时荧光定量PCR 中图分类号:S435.32摇 摇 摇 摇 文献标志码:A摇 摇 摇 摇 文章编号:1000-2030(2014)03-0065-07 Cloning and expression analysis of three genes encoding nicotinic acetylcholine receptor 琢subunit inLeptinotarsa decemlineata LI Chenge,QU Yang,HAN Zhaojun,JIANG Weihua* (College of Plant Protection/ Key Laboratory of Integrated Management of Crop Diseases and Pests, Ministry of Education,Nanjing Agricultural University,Nanjing210095,China) Abstract:Nicotinic acetylcholine receptors(nAChRs)play an important role in excitatory synaptictransmission in insects and are also