脊髓灰质炎灭活疫苗微球的的分析研究.pdf

中一l曾L冉●l院中■■甲t冉夫孽嘲—士j漳位■|吏健-丈 英语缩略语表 PLGA poly(1actide--CO·-glyeolide) BSA Albuminbovilie EDl’A tetracetic ethyleeediamine EUSA immunosorbent enzyme-linked assay oPV oral vaccine poliovirus 口V inactivatedvaccine poliovirus MHC majorhistocompatibilitycomples oD opticaldeesity PBS buffersaline phosphate U unit HRP horseradish peroxidase 55 中一一●¨奠巾一忡l韩^●I士^●位膏竞惜支 摘 要 传播性病毒疾病，自1988年实施消灭脊髓灰质炎(脊灰)战略以来，我国免疫 接种依赖口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(OPv)取得了令人瞩目的成绩。但是OPV 可引起疫茁相关寐癀病例(VAPP)和疫苗衍生株(VDPV)引起的病例。脊髓灰质炎 灭活疫苗唧Ⅵ可避免OPV上述的缺点。WHO指出当全球证实消除脊灰后，将 停止使用OPV，届时需要脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)来长期保持脊灰免疫水平。 相对于野毒株IPV，Sabin株IPV在制造和使用过程中更安全，对它的研究也 越来越受到重视。我所已研制出SabinIPV，为了研究其免疫效果，我们使用了 生物相容性好、可生物降解吸收、可控释放、增强抗原免疫原性的聚醣类材料聚 乳酸聚乙醇酸(PLGA)作为免疫佐剂改变疫苗的剂型，提高抗原的免疫原性。 本文的工作主要包括以下几个方面。 一、PLGA徽球制备条件的研究 本实验以BSA作为模拟鬣自研究制备微球的合适条件，获得了包裹率较高、 大小约为5llm、分散比较均匀的微球，大小适合肌肉注射免疫。以PLGA包裹 了I型脊髓灰质炎病毒Sabin株制备了l型脊髓灰质炎病毒Sabin株微球。电镜 下微球释放的I型脊髓灰质炎病毒Sabin株具有典型的Polio病毒形态特征，形 态和未包裹的I型脊髓灰质炎病毒Sabin株完全一样。经免疫电镜检测发现I型 脊髓灰质炎病毒颗粒在抗体桥的作用下紧密连接在～起，说明本实验采用的微球 制备技术既没有破坏病毒颗粒的完整性也没影响病毒的抗原性。用微量滴定法检 测微球释放活病毒的动力学特性，随着时间的延长微球释放的病毒滴度逐渐增 加，得到了较好的释放曲线。 二、Sabin株脊髓灰质炎灭滔疫苗(IPV)微球的研究 本实验以PLGA包裹人用单荆三价SabinIPV制备微球。扫描电镜下Sabin IPV微球的表面形态良好。电镜下观察到从微球中所释放出完整的I、II、lII型 -l囊并帐中■忡l冉^怖士主尊位_蛘l 病毒颗粒，通过免疫电镜观测到紧密连接在一起的病毒颗粒。用未包裹的Sabin IPV免疫小鼠后，小鼠体内在短时间内产生的抗体水平高，随着时间推移而降低。 用SabinIPV微球免疫小鼠后，小鼠体内在最初时产生的抗体水平低于未包裹 Sabin IPV免疫组的水平，但随着时间推移而升高，并且可以保持在一定的水平。 三、二苯氧乙醇对Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗