纤维素酶降解壳聚糖的的分析研究.pdfVIP

摘要 摘 要 近年来，低聚壳聚糖由于其功能的多样性和独特性，而广泛受到关注。本论文主要 对纤维素酶降解壳聚糖的水解条件及酶促反应动力学进行了研究，并用乙醇分布沉淀法 获得不同聚合度的低聚壳聚糖。 通过研究纤维素酶降解壳聚糖各因素对酶反应速度影响，得到以下结论：在pH5．0， 60℃下酶促反应速度最大；并且在反应的前3．5 h，反应时间与酶反应速度是线性增加 的；当底物浓度一定，酶浓度在0．05～0．3IU／mL范围内，酶促反应速度随酶浓度呈线性 增加。 在低底物浓度下，纤维素酶降解壳聚糖符合米氏方程的规律，其米氏常数Km=9．34 mg·mL～，最大反应速度Vm=7．96mg·L’lmin～。此外，酶反应速度还受壳聚糖脱乙酰度 的影响。实验表明，在较高的脱乙酰度范围(DD80％)内，酶反应速度随着脱乙酰度的 升高而下降。 通过对纤维素酶水解壳聚糖的条件研究，得出纤维素酶水解壳聚糖的最佳作用温度 中各组分，结果发现，3％壳聚糖水解液中2．5低聚糖比例为99．05％，确定了壳聚糖的 最佳底物浓度为3％。通过研究水解率及还原糖变化，确定了最佳酶加入量是6 IU／(g底 h。 物)；通过薄板层析(TLC)对不同水解时间下产物分析，得到最佳水解时间为16 采用乙醇分布沉淀法提取水解液中的低聚壳聚糖，并对所得各组分分析。实验结果 表明，采用乙醇分布沉淀法，75％乙醇沉淀可去除聚合度9以上的壳聚糖，87．5％乙醇 上清液主要为聚合度为7以下的低聚壳聚糖。而由1％、3％、5％、10％壳聚糖水解液得 分别是4％、15．6％、25％和29．1％。 关键词：纤维素酶；壳聚糖；低聚壳聚糖；水解条件 Abstract Abstract Inrecent aresultofthe and ofits diversity years，as uniqueness were extensiveattention．Inthis conditionsof got paper，thehydrolysis oligosaccharide kineticswerestudied．Adifferentof chitosancellulaseandreaction degree by ofthechitosan Wasobtained fractional with oligosaccharide through．the precipitation ethan01． factorsonthereaction cellulase．wethe various velocity、航th got following Bystudying Was cellulaseat reaction conclusions：Whenchitosan degrafedby pH5．0，60℃，thevelocity reachedthemaximum inthefirst3．5hofthereaction．thereactiontime