牛奶中酪蛋白与乳糖的分离.pptVIP

实验 牛奶中酪蛋白和乳糖的分离 一、实验目的： 掌握本实验的原理及操作方法。 二、实验原理： 牛奶中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35 g/L。酪蛋白在乳中是以酪蛋白酸钙-磷酸钙复合体胶粒存在，胶粒直径约为20～800nm，平均为100nm。 在酸或凝乳酶的作用下酪蛋白会沉淀，加工后可制得干酪或干酪素。本实验利用加酸，当达到酪蛋白等电点pH=4.7时，酪蛋白沉淀。脱脂乳中除去酪蛋白后剩下的液体为乳清，乳清中含有乳白蛋白和乳球蛋白，还有溶解状态的乳糖，乳中糖类的99.8%以上是乳糖，可通过浓缩、结晶制取乳糖。 三、实验材料和试剂 材料：脱脂乳或脱脂奶粉。 试剂：醋酸-醋酸钠缓冲溶液（PH=4.7），95%乙醇，乙醚， 碳酸钙粉末 四、实验步骤 （一）从牛奶中分离酪蛋白 1、在烧杯中加入2g脱脂奶粉，再加入加热至40℃的40mL PH=4.7的醋酸-醋酸钠缓冲溶液。 2、静置冷却至室温，倾去上层清液（留作分离乳糖用），剩下的悬浮液分别装入两支离心试管中，以2000rpm离心3～5min，倾出上层清液（合并于上一步收集的上层清液中），得酪蛋白粗品。 3、向离心管中加入5mL蒸馏水，用玻棒充分搅拌，洗涤除去其中的水溶性杂质（如乳清蛋白，乳糖以及残留的缓冲溶液），以2000rpm离心后弃去上层液，再用蒸馏水洗一次。 4、于试管中加入5mL95%乙醇，充分搅拌，离心后弃去乙醇溶液（除去磷脂类物质）。最后再用5mL乙醚以同样方法洗涤（以除去脂肪类物质）。将酪蛋白沉淀物晾干，称重、并计算得率。 （二） 从牛奶中分离乳糖 1、在除去酪蛋白的乳清中，加入1.5g CaCO3粉末，搅拌均匀后加热至沸。加CaCO3的目的一方面是中和溶液的酸性，防止加热时乳糖水解，另一方面又能使乳白蛋白沉淀。 2、过滤除去沉淀，加热浓缩至3～5mL，加入10mL 95%乙醇（注意离开火焰）和少量活性炭，搅拌均匀后，在水浴上加热至沸腾，趁热过滤，滤液必须澄清。加塞放置过夜（30h），乳糖结晶析出。 五、结果记录及分析： * * *