7.4 氧的供需及对发酵的影响.pptVIP

若测定某培养时间的摄氧率，则关闭通气阀，保持搅拌，在罐顶通氮气，赶走上面的空气。此时，由于耗氧，CL下降，仪表上电流值也不断下降 △t——停止供气后CL下降到最低点时所需时间 △i——在△t时间内的电流变化 三、KLa的测定 1、亚硫酸盐法（冷膜） 氧→ 亚硫酸钠的氧化 KLa.C* = 亚硫酸浓度的降低 Cu2+ 2Na2SO3+O2 → 2Na2SO4 2、平衡法 OUR KLa= ———— C*-CL 例：一个装料为7L的实验室小罐，通气量为1VVM（标态），发酵液的CL＝25%、空气进入时的氧含量为21%，废气排出的氧含量为19.8%，求此时菌体的摄氧率和发酵罐的KLa 式中C*可以查得，CL可以用溶氧电极测得，OUR也可算出，因此可求得KLa值 待溶氧到最低点后再恢复通气。这样可以得到溶氧随时间变化的曲线 用溶氧仪测定发酵过程的溶氧，开始时供氧和需氧达到平衡，溶氧是一条水平线 这时停止通气，保持搅拌，在罐顶通入氮气，赶掉氧气。由于微生物对氧的利用，溶氧迅速下降，过一段时间溶氧下降缓慢 3、动态法 △CL/△t=KLa(C*-CL)-OUR CL=-1/KLa(△CL/△t+OUR)+C* 将CL对△CL/△t+OUR作图，得到一条直线，斜率为-1/KLa因此可求得KLa，延长直线及纵坐标相交点为C* 溶解氧浓度随通气变化的情况 KLa的求取 OUR OUR 7.4.5 溶氧浓度的变化及其控制 一、典型的分批发酵中氧浓度的变化规律（一定KLa下）： OUR X Q CL 一般有一个低谷，在对数生长的末期 二、发酵过程中溶氧的控制 1、溶氧控制的策略 微生物反应: X S → P+ X π=a+bμ 菌体生长期： 酶系统 Ⅰ 酶系统 Ⅱ 关键因子 开始的细胞 长好以后的细胞 产物合成 产物形成期： 底物 产物 酶系统 Ⅱ 反应动力学问题 发酵过程的控制一般策略： 前期有利于菌体生长，中后期有利用产物的合成 溶氧控制的一般策略： 前期大于临溶氧浓度，中后期满足产物的形成。 2、溶氧控制的实例 GA X DO 谷氨酸发酵： 要求：氧饱和度1 控制：0-12小时 小通风 12小时后 增加通风 原因：0-12小时菌体量较小，采用小通风 12 一般认为，发酵初期较大的通风和搅拌而产生过大的剪切力，对菌体的生长有时会产生不利的影响，所以有时发酵初期采用小通风，停搅拌，不但有利于降低能耗，而且在工艺上也是必须的。但是通气增大的时间一定要把握好。 例： 生产肌苷酸： 通气量不变 17.15 mg/ml 24小时增加 22.55 mg/ml 30小时增加 18.25 mg/ml 36小时增加 12.34 mg/ml 例: 溶氧在青霉素发酵控制中的应用 控制的原则: 加糖速率正好使培养处于半饥饿状态, 即仅能维持菌的正常生理代谢, 而把更多的糖用于产物的合成. 三、发酵过程中溶氧浓度监控的意义 1、考察工艺控制是否满足要求 2、其它异常情况的表征 染菌、噬菌体、设备和操作故障 3、间接控制的措施 染菌后可能出现异常”跌零”; 也可能出现溶氧升高 搅拌停止,溶氧降低; 加油过量, 溶氧降低; 作为质量控制的指标: 如天冬氨酸发酵, 酵母发酵中好气转为厌气培养的时机是关键 小节： 了解微生物对氧的需求并掌握其中的基本概念 掌握反应器氧的传递方程，及其参数的测定 深入理解KLa的意义，了解反应器放大的基本概念 掌握发酵过程中溶氧浓度的调节方法，并认识监控 溶氧浓度的意义 * 碘量法测定水中溶解氧一、原理水样中加入硫酸锰和碱性碘化钾，水中溶解氧将低价锰氧化成高价锰，生成四价锰的氢氧化物棕色沉淀。加酸后，氢氧化物沉淀溶解，并与碘离子反应而释放出游离碘。以淀粉为指示剂，用硫代硫酸钠标准溶液滴定释放出的碘，据滴定溶液消耗量计算溶解氧含量。二、试剂1、硫酸锰溶液：称取480g硫酸锰（MnSO4?4H2O）溶于水，用水稀释至1000mL。此溶液加至酸化过的碘化钾溶液中，遇淀粉不得产生蓝色。2、碱性碘化钾溶液：称取500g氢氧化钠溶解于300—400mL水中；另称取150g碘化钾溶于200mL水中，待氢氧化钠溶液冷却后，将两溶液合并，混匀，用水稀释至1000mL。如有沉淀，则放置过夜后，倾出上层清液，贮于棕色瓶中，用橡皮塞塞紧，避光保存。此溶液酸化后，遇淀粉应不呈蓝色。3、1＋5硫酸溶液。4、1％（m/V