mpt64卡介苗重组疫苗的构建免疫原性及抗结核作用-生物通.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１１，３１（７）：１４１９ ? ｍｐｔ６４卡介苗重组疫苗的构建、免疫原性及 抗结核作用 １，２ ３△ ３ ３ 孙　颖 　张灵霞 　吴雪琼 　董恩军 （１中国科学院北京基因组研究所　北京　１０１３００　２北京技术交易促进中心　北京　１０００８０） （３中国人民解放军第３０９医院结核病研究所　北京　１０００９１） 摘要　通过基因工程重组技术将结核分枝杆菌保护性抗原ＭＰＴ６４的编码基因与穿梭质粒载体 ｐＹＵＢ２９５重组，采用电穿孔技术将重组质粒导入到卡介苗中，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增、聚 丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）对ｍｐｔ６４卡介苗重组疫苗鉴定：成功地构建了ＭＰＴ６４基因ｐＹＵＢ２９５ 重组质粒，ＭＰＴ６４蛋白在卡介苗中能分泌表达。卡介苗重组疫苗免疫原性试验表明：只有ｍｐｔ６４ 卡介苗重组疫苗组有ＭＰＴ６４特异性抗体产生，４５天时达到最高水平。脾淋巴细胞增殖试验表明 各组小鼠平均刺激指数达２０以上，ｍｐｔ６４卡介苗重组疫苗组小鼠脾淋巴细胞的刺激指数与对照 组差异无统计学意义。预防试验表明：ｍｐｔ６４卡介苗重组疫苗及卡介苗与生理盐水对照组比都能 延长结核分枝杆菌感染小鼠的半数死亡时间，降低２个月内的死亡率。结核分枝杆菌攻击后２个 月，处死小鼠时，小鼠脏器大体病变、脏器培养、抗体检测结果及淋巴细胞增殖结果，各组间差别 无统计学意义。初步实验结果表明：ｍｐｔ６４卡介苗重组疫苗对结核分枝杆菌感染有明显的预防作 用，但预防效果与卡介苗相比没有提高。 关键词　卡介苗　重组卡介苗　抗结核作用　免疫原性 中图分类号　Ｑ７８ 　　近年来，结核病疫情严重。卡介苗保护效力不尽 实验来评价 ｍｐｔ６４卡介苗重组疫苗对结核病的保护 如人意，新疫苗的研究势在必行。卡介苗作为一种疫 效果。 苗，它的免疫原性和安全性已经在半个多世纪的使用 １　材料与方法 过程中得到验证。卡介苗作为宿主在其中表达外源基 因在国内外疫苗界及结核病研究中受到重视。ＭＰＴ６４ １１　材　料 ［１］ 是一种２４ｋＤａ的分泌蛋白 ，能诱导结核病人或结核 １１１　主要试剂　ＴａｑＤＮＡ聚合酶 （上海生工生物技 菌素阳性者产生Ｔ淋巴细胞增殖反应，可能是结核分 术公司）、Ｔ４ＤＮＡ连接酶、ＡＴＰ、ｄＮＴＰ、Ｈｉｎｄ 、ＢａｍＨ Ⅲ 枝杆菌的一种保护性抗原；而且 ＭＰＴ６４只存在结核分 Ⅰ、Ｔ载体（Ｐｒｏｍｅｇａ公司产品）、ＤＮＡＭａｒｋｅｒ、１ｋｂＤＮＡ 枝杆菌复合群中，且大部分卡介苗中缺乏 ＭＰＴ６４编码 Ｌａｄｄｅｒ（ＭＢＩ公司），Ｍｉｄｄｌｅｂｒｏｏｋ７Ｈ１０琼脂培养基 基因，使卡介苗表达 ＭＰＴ６４理论上也可提高卡介苗对 （Ｄｉｆｃｏ公司产品），其余试剂均为国产或进口分装。 结核病的保护力。将ＭＰＴ６４的基因通过基因重组技术 １１２　结核分枝杆菌和卡介苗 　结核分枝杆菌 导入到卡介苗中得到卡介苗重组疫苗，对其进行免疫 Ｈ３７Ｒｖ购自中国药品生物制品检定所，卡介苗购自北 原性鉴定，通过ｍｐｔ６４卡介苗重组疫苗对结核病预防 京生物制品研究所。 １１３　质粒和宿主菌　大肠杆菌－分枝杆菌穿梭表 收稿日期：２０１０１１１６　　修回日期：２０１１０４１９ 达质粒 ｐＹＵＢ２９５、ＦＲ０１由内蒙古大学达来教授惠赠，