重叠延伸PCR技术及其在基因工地进程上的应用.pdfVIP

维普资讯 分了植物育种，2006年，第 4卷，第 5期，第 747—750页 MolecularPlantBreeding，2006，Vo1．4，No．5，747-750 新思路、新技术、新方法 NovelThinking Technology 重叠延伸PCR技术及其在基因工程上的应用 徐芳12．姚泉洪 z 熊爱生 z彭 日荷 侯喜林 曹兵 1南京农业大学园艺学院，南京，210095；2上海市农业科学院生物中心，上海，201106；3三亚市南繁科学技术研究院，三亚，572000 通讯作者，hxl@njau．edu．ca，caobing@sanya．gov．ca 摘 要 重叠延伸PCR技术(genesplicingbyoverlapextensionPCR，简称 SOEPCR)~t于采用具有互补末端 的引物，使PCR产物形成了重叠链，从而在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸，将不同来源的扩增片段重 叠拼接起来。此技术利用PCR技术能够在体外进行有效的基因重组，而且不需要内切酶消化和连接酶处 理，可利用这一技术很快获得其它依靠限制性内切酶消化的方法难 以得到的产物。重叠延伸PCR技术成功 的关键是重叠互补引物的设计。重叠延伸 PCR在基因的定点突变、融合基因的构建、长片段基因的合成、基 因敲除以及 目的基因的扩增等方面有其广泛而独特的应用。本文综述了重叠延伸PCR的原理和 目前的应用 情况，并指出了此技术中的注意事项，展望了其应用前景。 关键词 重叠延伸 PCR，互补引物，基因工程 SOEPCR anditsApplicationinGeneticEngineering XuFang。 YaoQuanhong2XiongAisheng2PengRihe HouXilin’CaoBing3’ 1CollegeofHorticulture，NanjingAgriculturalUniversity,Nanjing，210095；2Agro—BiotechnologyResearchCenterofShanghaiAcademyofAgrieul— turalSciences，Shnahgai，201106；3SnayaScienceTechnologyAcademyforCropWinterMultiplication，Snaya,572000 Correspondingauthor,hxl@njan．edu．ca，caobing@sanya．gov．ca Abstract GenesplicingbyoverlapextensionPCR (SOEPCR)isprovidedforjoiningdifferentDNAmolecules bymeansofPCRcardedoutoneachmoleculeusingoligonucleotideprimersdesignedSOthattheendsofthere— sultantPCRproductscontaincomplementarysequences．Thismethodisanew approachforrecombiningDNA moleculesatprecisejunctionsirrespectiveofnucleotidesequencesattherecombinationsiteandwithouttheuseof restrictionendonucleasesorligase．Theoverlapprimersdesing isthekeyfactorofrthesuccessfulaccomplishment ofSOEPCR．SOEPCR iswidelyandparticularlyappliedinthesite—directedmutagenesisofgene，constructionof fusiongene，synthesisoflongsegmentsofDNA，geneknockout，generationofniterestgeneandSOon．Th ispaper describedhteprincipleandapplicationofSOEPCR．Somerelateddetailsaboutthismehtodwerecommentedon． Inaddition，htisreviewalsopred