N-烷基化壳聚糖转基因载体的的分析研究.pdfVIP

摘要 壳聚糖(2-氨墓—2一脱氧一I卜-D葡糖)是一种线性碱性多糖，具有独特的化学 性质和生物特性。由于壳聚糖分子中含有活泼的烃基和氨基，可以进行多种化学 修饰，因此其衍生物在生物医学工程领域有潜在的应用价值。 基于壳聚糖的生物相容性、可降解性和良好的跨细胞膜性，合成了亲疏水性 可调，无细胞毒性的烷基化壳聚糖转基因载体。探索壳聚糖分子量、烷基取代度、 不同烷基侧链等对配合物的形成和结构的影响，进一步研究其对基因转染率的影 响，深化烷基化壳聚糖载体的跨膜机制，提高基因的缓释性和转染率。主要工作 包括： 1．采用不同碳链长度澳代烷对壳聚糖改性制备了系列N．烷基化壳聚糖，并由红 外光谱和x．射线衍射证实烷基确已引入壳聚糖分子，并使其分子结构发生改 变，尤其是削弱了内部的氢键。研究了壳聚糖及其衍牛物的特性粘数和平衡 溶胀度。烷基化壳聚糖的特性粘数随取代的烷基链长度的增加而降低。而烷 基化壳聚糖的平衡溶胀度低于未烷基化壳聚糖。 2．以琼脂糖凝胶电泳考察配合物的形成，显示随着壳聚糖衍生物含量的增加， 参与复合物的DNA含量提高，并在电荷比为1／4时出现极值。动力学光散 射测试配合物单峰分布下的平均粒径主要分布在150rim左右。C2C12细胞 DNA 3．1载体体外转染实验表明烷基化改性的壳聚糖与DNA的复 V790-20PC 合物转染效率高于纯DNA及磷酸钙介导的转染率，接近阳离子脂质体。 PIRES2．EGPF介导体外转染显示报告基因能在MCF7细胞中得以表达。 3．以荧光探针法测定了芘在壳聚糖及衍生物溶液中的发射光谱．并计算出其极 性参数值11／13。烷基化壳聚糖溶液的临界缔合浓度约8x10amg／ml，表明引 入烷基后壳聚糖的疏水性增加促进了自缔合的形成。示差扫描量热实验显示 壳聚糖及衍生物同二棕榈酰磷酰胆碱之间强烈的相互作用，在其影响下 DPPC的相转变焓随浓度增加明显减小 关键{司：N一烷基化壳聚糖，非病毒基因释放载体，转染，自缔合，荧光探针 Abstract Chitosan linearcationic with f2一amino-2一deoxy-B-D-glucose)ispolysaccharide a of series chemical andbiofunctions．ChitosanCanbemedified unique properties withitsactive andamino derivativeshavea inthe hydroxyl groups．Its great potential ofbiomedical application engineering． Basedonthe andfinetransfectioniilchitosan． biocompatibility,degradability chitosanhavebeen tobe andcallbe synthesized N-alkyl nontoxicity laydrophilicity and effectofchitoSallmolecular of hydrophobibity．m weight，degreesubstitution， structureof chitosan／DNAandthesizeof onthe N-alkyl complex