植物中ADP核糖化蛋白质的鉴定.PDFVIP

植物中ADP 核糖化蛋白质的鉴定 生命科学学院 梁勤 指导老师 葛晓春 摘要：ADP 核糖化修饰是一种蛋白质翻译后修饰。目前，在植物中尚没有一种由于内源 ADP 核糖基转移酶的作用而被修饰的蛋白质被分离和证实。本课题旨在验证本实验室前期通 过蛋白质组学分离得到五个蛋白质是否能被修饰。 关键词：ADP 核糖化修饰，拟南芥，生物素标记的NAD+ Abstract：ADP-ribosylation is a type of post-translational modification of proteins. No proteins in plant have been reported to be modified by endogenous ADP-ribosyl transferase so far. This project aims to confirm the five proteins in Arabidopsis, isolated through proteomics, which may be modified by ADP-ribosylation. Keywords: ADP-ribosylation, Arabidopsis, Biotin-NAD+ 引言（前言） + ADP 核糖化修饰是一种蛋白质翻译后修饰。生物体的细胞内的NAD 不仅在氧 化还原反应中起辅酶作用，还可以引起蛋白质的ADP 核糖化修饰。在ADP 核糖转 + 移酶的催化下，NAD 分子脱掉尼克酰氨基团，剩下的ADP 核糖与蛋白质上的精氨 酸和半胱氨酸等残基形成共价键，从而改变蛋白质的性质；这种反应还可被ADP 核糖水解酶所逆转，使得ADP 核糖化修饰成为一种可逆的蛋白质修饰方式。目前 在植物中，尚没有一种由于内源ADP 核糖基转移酶的作用而被修饰的蛋白质被分 离和证实。作为对蛋白质功能调控的一种手段，我们认为这种翻译后修饰功能没 有在植物中消亡的理由。对于植物中ADP 核糖化修饰蛋白的研究不仅可以弥补这 方面信息的缺失，对了解植物中蛋白质功能的调节以及生理生化过程也具有重要 作用。 该望道项目的主要工作是，验证本实验室通过蛋白组学手段分离到的五个拟 南芥中的蛋白质是否能被ADP 核糖化修饰，以增加我们对该蛋白和这种修饰的认 识，对于阐明其具体被修饰的机制也是必需的。 1 目前国内外研究进展 目前为止，关于ADP 核糖对蛋白质的功能的调节作用的了解非常之少。这种 修饰可能由于外源ADP 核糖基转移酶引起，也可由于内源的转移酶引起。已知一 图1 ADP 核糖化修饰概述 些细菌毒素具有ADP 核糖基转移酶的活性，比如霍乱毒素，可以使宿主细胞膜上 的Gα 蛋白被ADP 核糖修饰从而不可逆地失去功能；还有的毒素如白喉毒素可以 使宿主细胞的延伸因子EF-2、肌动蛋白单体和GTP 结合蛋白Rho 等被修饰从而 永久地被激活或失活。植物病原菌如假单胞菌属的致病菌中的HopU1 蛋白也可以 使得拟南芥的GRP7 蛋白，GRP8 蛋白，At4g24770 蛋白，At2g37220 和At5g50250 蛋白发生ADP 核糖化修饰。内源ADP 核糖基转移酶的活性在动物中有报道，如牛 线粒体中的谷胱氨酸脱氢酶，可受细胞内ADP 核糖化及去核糖化的修饰，当谷胱 氨酸脱氢酶上的Cys 被ADP 核糖化时，活性被抑制，当ADP 核糖从ADP 核糖化蛋 白上被水解掉时，该酶又恢复了活性； GAPDH 也被报道可以发生ADP 核糖化修 饰，这种修饰在一氧化氮、高氧化胁迫的作用下会增强。至今，在植物中，尚没 有由于内源ADP 核糖基转移酶活性被报道。 根据进化分析，我们认为，ADP 核糖化修饰应该存在于植物中。在动物中目 前报道可被ADP 核糖化修饰的往往是一些组成型表达的蛋白，如组蛋白、肌动蛋 白、谷胱氨酸脱氢酶、三磷酸甘油醛脱氢酶等，这些蛋白在植物中也存在。目前 需要得到进一步的证据证明这种修饰在植物中是存在的。 2 本实验室前期工作