imvic试验imvictest.ppt

細菌的代謝 metabolism Usually, bacteria produce extracellular enzymes to degrade (or digest) surrounding nutrient molecules into small molecules for importing those nutrients into bacterial cells. Carbohydrate source Nitrogen source (mainly protein) Lipid Chapter 26, 27, and28 Because different groups of bacteria have different nutrient requirements, the enzymatic activities for nutrients could be used for a reference for bacterial identification. the most commonly used enzymatic (or called biochemical) activities for identification is the IMViC test. IMViC試驗 (IMViC Test) 腸道桿菌科中主要組別之鑑定，可依其對特異受質之生化性質與酵素反應而定。可用IMViC之系列試驗，包括蚓垛（indole）試驗、甲基紅（methyl red）試驗、伏普（Voges Proskauer）試驗及檸檬酸鹽利用（citrate utilization）試驗。 IMViC試驗包含四個測試：I指Indole產生試驗，M：指Methyl red試驗，Vi：指Voges-Proskauer試驗，C：指Citrate試驗。 Indole production test色氨酸（tryptophan）為主要氨基酸的一種，可藉由某些微生物之酵素作用進行氧化，即以色氨酸酵素（tryptophanase）將其轉變為代謝產物(indole, pyruvic acid, ammonia)，其反應如下： 並非所有微生物皆有水解色氨酸之能力，故可作為生化反應指標，本實驗使用SIM瓊脂，內含色氨酸作為受質，若微生物分解色氨酸（tryptophan）產生indole，當加入柯瓦克試劑（Kovac reagent）時，indole與柯瓦克試劑（Kovac reagent）反應時，試劑層會呈櫻桃紅色。試劑中含ρ-dimethylaminobenzaldehyde 、butanol（丁醇）及鹽酸，indole被酸化丁醇萃取至試劑層，再與ρ -dimethylaminobenzaldehyde形成複合物，產生櫻桃紅色，其反應如下： SIM medium Pancreatic Digest of Casein.................... 20.0 g Peptic Digest of Animal Tissue …............. 6.1 g Ferrous Ammonium Sulfate .................... 0.2 g Sodium Thiosulfate .….............................. 0.2 g Agar ......................................................... 3.5 g Methyl red test當細菌利用葡萄糖醱酵的過程中，可能產生不同的終產物，有些菌利用葡萄糖時會產生大量的酸，有些菌則會將酸性物質轉換為偏中性物質。當細菌利用葡萄糖產生高濃度酸性產物時，若加入甲基紅指示劑，則有紅色生成。雖然所有腸道細菌皆可醱酵葡萄糖產生有機酸，但本實驗仍可區分Escherichia coli 和Enterogenes aerogenes。此二菌於培養初期均可產生有機酸終產物，但Escherichia coli於培養終了仍可穩定維持低酸性pH4，Enterogenes aerogenes則於後期將酸性產物轉為乙醇與乙醯甲基甲醇（acetylmethylcarbinol）等偏中性物質，致使pH升高至6左右，甲基紅於pH4範圍時呈紅 色，表陽性反應，於pH6時仍顯現酸之存在，但因離子濃度較低，甲基紅轉為黃色，表陰性反應。產生非酸性產物之檢測可用VP test測得。（methyl red變色範圍：pH4.4紅色~pH6.0黃色） VP test用以測定微生物代謝葡萄糖所產生之有機酸轉變為非酸性或中性產物如乙醯甲基甲醇（acetylmethylcarbinol）之能力，本試驗使用 試劑